应用基因组改组技术选育真菌α-淀粉酶高产菌株的研究.pdfVIP

摘要 摘 要 以实验室保藏的米曲霉FS-16为原始出发菌株，通过传统诱变方法构建正突变 库。通过致死曲线的测定，确定紫外诱变照射剂量为160s，微波诱变辐射剂量为25s。 出发菌株分别经紫外诱变、微波诱变，采用淀粉平板透明圈初筛、液体发酵复筛， 最终从2000多个突变株中筛选到a一淀粉酶产量较高稳定性较好的突变株FU-8、 FU一26、FW一11l及FW-130。 通过单因素实验获得米曲霉原生质体制备和再生的最佳条件：菌龄15h，酶解 温度28。C、裂解时间2．5h、0．6mol／L NaCl NaCl作为渗透压稳定剂，含0．6mol／L 的PDA培养基为再生培养基。通过响应面分析法对破壁酶系统进行研究，获得最佳 酶系组成为：蜗牛酶O．8％、纤维素酶0．8％、溶菌酶0．5％。 通过米曲霉原生质体灭活实验得出，用紫外线处理180S或热处理12min，米曲 霉原生质体即可达到100％灭活：原生质体融合条件研究表明最适融合条件为： 经过三轮递推式融合后筛选得到一株能够稳定遗传的改组菌株F3-542，其酶活较原 始菌株提高了61．5％，发酵周期也相对缩短了24h，达到了选育高产菌株的目的。 对改组菌株F3—542的发酵条件进行优化，首先通过单因素实验可知最佳碳源为 玉米粉，最佳有机氮源为牛肉膏，最佳无机氮源为硝酸钠。最适培养条件为：初始 基配方进行进一步优化，获得它们的最佳组合(g／L)：玉米粉56，牛肉膏26，NaN03 4．5，K2HP04 1．5，FeS040．005。整体优化后，改组菌F3．542从最初酶 1．4，MgS04 活力为3920U／mL提高至5147．5U／mL，比最初酶活力提高了31．3％。 关键词：a．淀粉酶，米曲霉，诱变，基因组改组，发酵优化 Abstract Abstract strain FS一16 inour wastreated OriginalAspergillusoryzae preservedlaboratory withultravioletand eonditionswereas microwavesradiation．Themutation follows，UV for160s Was andmicrowavesfor methodstarch spot 25s．Prescreening platehydrolysis was mutant witll method fermentation．Thestrains yield， method．Rescreeningliquid lligh FU一8、FU-26wereobtainedUV andthemutantstrainsnamed namely by mutagenesis FW-11 30wereobtainedmicrowaveirradiation 1，FW-1 by factor conditionsfor and Throughsingle test，theoptimized protoplastpreparation