藻蓝蛋白酶解肽的分离纯化及其细胞毒活性.pdfVIP

136 2012，Vo1．33，No．01 艮 晶科 学 ※生物工程 藻蓝蛋白酶解肽的分离纯化及其细胞毒活性 王雪青，邓 伟，杨进芳，毛羽聪，史中明 (天津市食品与生物技术重点实验室，天津商业大学生物技术与食品科学学院，天津 300134) 摘 要：研究钝顶螺旋藻(Spirulinaplatensis)藻蓝蛋白(C-phycocyanin，CPC)及其胰蛋白酶水解肽的分离纯化。采 用反复冻融和超声破碎法破碎细胞，用28~55g／100mL硫酸铵沉淀反复盐析获得纯度(A6~ lA2som)为2．19的藻蓝蛋白， 再通过羟基磷灰石(HA)柱层析和SephacrylS．200HR凝胶层析对其进行纯化，得到纯度 (A620m]A2s0m)为3，89藻蓝蛋白。 纯化后的藻蓝蛋白在40℃条件下经胰蛋白酶酶解60rain后，用DEAE—SepharoseFastFlow柱层析对酶解肽产物进行 分离，收集得到4组藻蓝蛋白酶解肽。采用MTT方法，研究藻蓝蛋 白、酶解混合液、分离的4个酶解肽组分对 肿瘤细胞系HeLa和293T增殖的影响。结果显示：肽组分 1和4对HeLa细胞的抑制率分别为37．71％和47．04％，而 混合肽和藻蓝蛋白抑制率分别为34．02％和26．03％，因此活性肽组分 1和4显示出较好的肿瘤抑制效果，而这两种活 性肽组分对正常细胞 293T并无细胞毒活性，特别是组分4效果最明显，是极具开发潜力的保健产品。 关键词 ：藻蓝蛋白；纯化 ；酶解肽 ；细胞毒活性 PurificationandCytotoxicityofC—Phycocyanin(C—PC)fromSpirulinaplatensnadItsTrypticPeptides W ANG Xue—qing，DENG W ei，YANG Jin—fang，MAO Yu—cong，SHIZhong-ming (TianjinKeyLaboratoryofFoodBiotechnology，CollegeofBiotechnologyandF0odScience， TianjinUniversityofCommerce，Tianjin 300134，China) Abstract：Thispaperdealswiththeseparation，purificationandcytotoxiciytofC-phycocynain(C—PC)fromSpirulinaplatensis andits廿ypticpeptides．RepeatedrfeezingnadthawingcoupledwihtultrasonictreatmentWasusedfordisruptinghtecellwall ofSpi~linaplatens，Thepuriyt(A6 280—)ofC—PCwas2．19afterfractionalprec~itationby28—55g／100mL(NI-I4)2SO4 andcouldreach3．89afterfurtherpurificationbysequentialchromatographyonhydroxylapatite(HA)columnandSephacrylS-200 HR gelcolumn．ThepurifiedC—PC washydrolyzedbyrtypsinat40℃ for60min．Fourpeptideswereobtainedfrom hte hydrolysateofC-PCbyDEAE—SepharoseFastFlowcolumn chromatography．Th ecytotoxiciyt ofC—PCanditshydrolysate aswellashte4peptidesonHeLaand293TcellswasevaluatedbyMTT assay．Th eresults showedhtattheinhibitionratesof peptidefractionsIna dIV，C—PC hydrolysatena