XPD和P53对HepG2．2．15增殖及乙型肝炎病毒X蛋白表达的影响.pdfVIP

100 TianjinMedJ，Feb2012，Vol40No2 论著 doi：lO．3969~．issn．0253—9896．2012．02．002 XPD和P53对HepG2．2．15增殖及乙型肝炎病毒X蛋白 表达的影响 丁 浩 张吉翔 摘要 目的：探讨人着色性干皮病基因D(XPD)和P53对人肝癌细胞株HepG2．2．15增殖及乙型肝炎病毒x蛋白 (HBx)、Bcl一2和Bax基因表达的影响。方法 ：用脂质体转染法将重组质粒pEGFP—N2／XPD和空载质粒pEGFP—N2转 染HepG2．2．15细胞，转染后第2天给予20Izmol／L的Pifithfin—ct(P53抑制剂)孵育24h。分为空白对照组、pEGFP—N2 组 、pEGFP—N2／XPD组 、pEGFP—N2／XPD+Pifithrin—o．／组及 Pifithfin—ot组 。用RT—PCR和Westernblotting方法检测 XPD、HBx、Bcl一2和Bax表达的变化 ；用MTT法观察细胞增殖活力；用流式细胞仪检测细胞周期。结果：(1)重组质粒 pEGFP—N2／XPD的转染使得XPD表达增高(均P0．001)；XPD表达增高使得HBx和Bcl一2表达降低，同时使得Bax表 达增高，而Pifithfin—o能【抑制XPD这一作用(均P0．01)。(2)XPD表达增高抑制了细胞增殖活力 ，而Pifithrin一0能【抑制 XPD降低细胞活力的作用(均P0．001)。(3)XPD表达增高引起了细胞G。期增加、s期减少，而Pifithfin—能抑制XPD 这一作用 (均P0．001)。结论：XPD是通过P53途径抑制肝癌细胞增殖，下调HBx和Bcl一2的表达并上调Bax的表达； XPD、P53和HBx三者之间能相互作用、相互影响，共同调节肝癌的发生与发展。 关键词 肝肿瘤 癌 细胞系，肿瘤 转染 着色性干皮病蛋白质D组 病毒蛋白质类 肝炎病毒 ，乙型 基 因．p53 EffectsofXPD andP53onProliferationofHepG2．2．15andExpressionof HepatitisBVirusX Protein DINGHao，ZHANGJixiang DepartmentofGastroenterology，theSecondAffiliatedHospitalofNanchangUniversity， JiangxiProvincialKeyLaboratoryofMolecularMedicine，Nanchang330006，China Abstract Objective：ToinvestigateeffectsofxerodermapigmentosumD (XPD)andP53ontheproliferationof HepG2．2．15，humanhepatomacellsandtheexpressionsofhepatitisBvirusXprotein(HBx)，Bcl-2andBax．Methods：Re— combinantplasmidpEGFP—N2／XPD andvacantvectorplasmidpEGFP-N2weretransfectedintoHepG2．2．15byliposome． Onthenextday，thesecellswereincubatedwithPifithrin一仅fP53inhibitor)ata20~ImolL／concentrationfor24h．Cellswere divided intofivegroups，blankcontrolgroup，pEGFP-N2 group，pEGFP-N2／XPD group，pEGFP—N2／XPD