脑胶质瘤中CLDN-7基因甲基化状态及蛋白表达的研究.pdfVIP

安 徽 医 药 AnhuiMedicalandPharmaceuticalJournal2013Jan；17(1) ·53· 脑胶质瘤中CLDN一7基因甲基化状态及蛋白表达的研究 刘 正，徐培坤，朱立新，成金民 (安徽 医科大学第一附属医院神经外科 ，安徽 合肥 230022) 摘要 ：目的 探讨脑胶质瘤血浆中CLDN-7基因的甲基化状况及蛋白表达的关系。方法 采用巢式 PCR、亚硫酸氢盐测序PCR (BSP)及免疫组织化学技术方法 ，检测56例脑胶质瘤血清标本中CLDN-7基因启动子区CpG岛的甲基化状态，分析其 甲基化 程度、蛋白表达和临床资料之间的相关性。结果 脑胶质瘤患者血清中CLDN-7基因启动子区甲基化率为35．3％(18／51)，按 WHO病理分级，其中低级别(I～Ⅱ级)组胶质瘤中基因启动子区甲基化率25．O％(9／36)低于高级别(Ⅲ～IV级)组甲基化率 60．O％(9／15)，两者之间存在显著差别(P0．05)；甲基化蛋白表达阳性率为55．6％ (10／18)，未 甲基化的蛋 白阳性表达率为 84．8％(28／33)。结论 CLDN-7基因启动子区CpG岛中存在甲基化现象，与脑胶质瘤发生有关；基因的甲基化率与蛋 白表达 呈负相关关系。 关键词：紧密连接蛋白-7；CpG岛；甲基化；脑胶质瘤 M ethylationofCLDN一7geneandproteinexpression inglioma LIU Zheng。XU Pei．kun．ZHU Li．xin．etal (DepartmentofNeurosurgery，TheFirstAffiliatedHospital，AnhuiMedicalUniversity，Anhui230022，China) Abstract：Objective TostudythemethylationofCLDN-7andproteinexpressioninglioma．Methods nPCRandBSPwasadoptedto investigatethepromoterrfequencyofthesegenesin56casesofgliomatissue．TheCLDN-7expressionin56gliomaspecimenswasexam— inedbyimmunohistochemistrymethod．Therelationshipbetweenrfequencyofmethylationofthisgenena dclinicaldiseasematerial was analyzed．Results Inpatientionswit}lglioma。therfequencyofmethylationinCLDN_7was35．3％(18／51)．TherateofCLDN一7pro— motermethylationingradesI～IIgliomaswassignificantlylowerthna that(60．0％)inrgadesⅢ一1Vgliomas(尸0．05)．Conclu· sion CLDN-7promoter(CpGisland)hypermethylationexistsinglioma，whichmaycorrelatewiththeoccurrenceofglioma． Keywords：CLDN-7；CpG；methylation；glioma 脑胶质瘤是神经系统最常见的原发性恶性肿瘤，近年来各 1．2．2 DNA 甲基化修饰 按 EpiGENETEKonestepDNA 种恶性肿瘤的DNA甲基化现象成为研究的热点之一。目前在 Modificationkit步骤进行修饰：(1)取90％乙醇 1mL加入 lO 其他恶性肿瘤中陆续检测出CLDN-7基因启动子区CpG岛高 G3(平衡液)，取以上50 L混合液体加入 200 M洗涤 甲基化现象 ，因此认为脑胶质瘤 CpG岛的甲基化现象可能 DNA，8min后，离心2000r·min ；(2)加入300MmG4修 与其发生存在一定关系。本实验采用巢式PCR方法和BSP方 饰，离心2000