大葱油注射液对胃癌裸鼠移植瘤的抑瘤作用.pdfVIP

中文摘要 大葱油注射液对胃癌裸鼠移植瘤的抑瘤作用 摘 要 目的：本实验为中国大葱防治胃癌系列研究的后续研 究，前期实验中用大葱提取物作用于体外培养的人胃腺癌 细胞株MGC．803，能有效抑制胃癌细胞增殖，低浓度有 诱导细胞分化作用，高浓度则诱导凋亡；证实Ca2+和 CAMP是胃癌细胞凋亡信号传导过程中的重要信息分子， 大葱油可能是通过上调细胞内第二信使Ca2+和CAMP水 平实现的。本实验将大葱油制各成注射液，完成其对人胃 腺癌细胞株MGC．803体外抗肿瘤敏感性检测后；观察该 注射液对荷瘤裸鼠MGC．803皮下移植瘤的生长抑制作用 及其毒性作用。 方法：确定大葱油注射液半数杀伤浓度(IC，。)：人胃 腺癌细胞株MGC．803复苏后接种于含小牛血清的 RMPll640培养液中，37℃，5％二氧化碳条件下培养。取 对数生长期细胞，采用MTT法，不同浓度的大葱油注射 作用于MGC．803细胞24小时、48小时、72小时后，测 定细胞增殖抑制率，用POMS软件程序运算出半数杀伤 浓度(ICso)。 大葱油注射液的制备：大葱油0．49加入20mg／ml的 吐温一80溶液后，安瓿封存。100℃流通蒸气灭菌30分钟， 贮存在避光处。 大葱油注射液毒性试验：取6～7周龄，体重20～22 中文摘要 克的昆明种小鼠，每10只为一组，共两组。第一组腹腔 注射10mg／ml的大葱油注射液0．5ml，第二组腹腔注射 0．25ml。用药后观察一周，未见小鼠死亡，遂行最大耐受 量实验。取6～7周龄，体重20～22克的昆明种小鼠20 只，给每只小鼠腹腔注射最大浓度(10mg／m1)和最大容 积(1m1)的大葱油注射液，上、下午各一次，观察7天。 建立裸鼠移植瘤模型：选用对数生长期的MGC-803 细胞，收集并调整细胞数，用无血清的培养液稀释细胞使 细胞终浓度达到1×107个／ml。每只裸鼠左腋皮下接种 o．2ml，注射局部出现明显的皮丘后，观察至移植瘤模型 建立。 实验分组和用药方法：将10只荷瘤鼠分为两组。每 天的上、下午固定时间注射大葱油注射液，实验组(5只) 腹腔注射10rag／m1的大葱油注射液o．5ml／次，对照组(5 O．5ml／次，连续32天。 只)腹腔注射20mg／ml吐温一80 抑瘤效果观察：实验期间动态观察肿瘤生长情况，每 周用游标卡尺测量肿瘤最大长径(a)及最小短径(b)， 根据公式v=ab2／2，计算肿瘸体积(mm3)。末次给药24 小时实验结束，脱颈处死裸鼠，剥离肿瘤并称量瘤重，计 算肿瘤生长抑制率。离体肿瘤用10％中性甲醛溶液固定， 石蜡包埋、切片，做HE及Feulgen染色。分析HE染色 切片中肿瘤细胞核分裂数目；采用图象分析仪分析 Feulgen染色切片中的DNA指数及平均DNA质量。 大葱油注射液毒性反应：①实验结束时，取鼠尾血测 白细胞计数、血小板计数；取裸鼠股骨，用lml注射器 吸入一定量的Hank’S液，冲出骨髓液，做骨髓有核细胞 中文摘要 计数；②裸鼠去瘤后末体重=裸鼠末体重一瘤重，根据去瘤 后末体重／初体重比值评价大葱油注射液的毒性反应。当 该比值0．8时，为无毒性反应；小于0．8时，视为有毒 性反应。 结果：大葱油注射液的半数杀伤浓度(IC50)：当不同 浓度的大葱油注射液作用于胃癌细胞株MGC一803时，细 胞增殖抑制率具有浓度依赖性和时间依赖性。12．5tag／ml、 作用24小时，细胞增殖抑制率分别为5．36％、38．59％、 49．09％、59．61％、75．92％；作用48小时，分别为14．29％、 44．00％、55．56％、64．15％、79．67％；作用72小时，分别 m1。 大葱油注射液的最大耐受量实验：观察七天，小鼠无 一只死亡，进食、活动、体重均未见异常，解剖后体内脏 器也无异常。 大葱油注射液抑瘤实验：自大葱油注射液注射之日 起，每七天做一次肿瘤测量，计算出每只肿瘤体积。第7 天、第14天、第21天、第28天、第32天对照组肿瘤平 1130．69 mm3、1197．78 mm