大鼠局灶脑缺血预处理对脑功能保护的实验研究.pdfVIP

中文摘要 嗣 的 建立脑缺盘耐受模型，研究凋亡耀关基因Bcl一2、Bax和缺斑 耐受的关系，探讨局灶脑缺血预处理是否通过拭凋亡机制产生缺 虫耐受作用。 方 法 1)动物模型的建立和分缓：选择体重为240rag一270rag的健 康雄性Wistar大鼠(魏于中国医群大学附属二院动物都)56哭，参 照改良Haruo Magasawa法建立大脑中动脉缺血模型。动物随机 分为4缀：缺盘缰(16昃)，予缺斑l，j、时蒿再灌注；预处理缀(12 必)，子缺盘10分钟；颈处理袄血组(16只)，予缺盘lO分钟詹褥 灌注，3天君再次缺蛊1小时；假手术组(12只)，不阻断斑流。每 缱分必嚣部分，一部分大鼠断头处死，行TIC染色，角数鹃檩撬摄 像后，利露憨像分折仪测定梗死瑟积，然后根据公式计算梗死体 积；另一部分大鼠经心脏4％多聚甲醛灌注固定处死，石蜡包埋， 按6}j,In切片，甥片然隧予矮处理的载凌冀上，用前脱媾至东，行免 疫组亿等染色。(2)Trc和HE染色：观察大鼠脑梗死的体积及缝 织病理学改变。(3)POD法染色：观察粹经缨臆撰亡情况。(4)免 疫组化染色：观察Bcl一2、Bax蛋白表达酶变化。5)数据处理：掰 脊实验数据以均值±标准差(囊±s)表示，统计分斩用t梭验。6) 试剂：饿染色、Bcl-2和Bax免疫缀化染毡、撼亡纽脆POD染色 试剂盒均购予武汉博士德公司。 结 粜 1)TTC染畿：假手术组和缺血预处理缀无梗死灶，缺血纽梗 ·l· 死灶位于缺血侧颞叶、顶叶皮质、尾状壳、壳核区，预处理缺血组的 0．01)。2)HE染色：假手术组和预处理组均未见明显病理改 变，缺血组的梗死体积与TrC染色显示相同。3)原位凋亡细胞测 定(POD法)：预处理组和假手术组仅可见0—3个散在的凋亡细 胞出现于皮质、胼胝体及基底节区。缺血组梗死灶周围的半暗带 内可见大量神经元胶质细胞及部分血管内皮细胞发生凋亡。预处 理缺血组半暗带内的凋亡细胞数较缺血组明显减少(P0．01)。 4)Bcl一2及Bax蛋白表达：假手术组及各实验组非缺血侧的大脑 半球无或仅有少量Bcl一2弱阳性表达。与假手术组相比，预处理 组缺血侧大脑半球Bcl一2阳性细胞数明显增加(P0．01)，缺血 组在缺血侧梗死周边区Bcl一2蛋白表达也增加(P0．01)。与缺 血组比较，预处理缺血组Bcl一2蛋白表达显著升高(P0．01)。 Bax蛋白在各组表达无显著差异。j j 结 论 1)局灶脑缺血预处理后大鼠的同侧脑内产生缺血耐受，具体 表现为：产生Bcl一2蛋白的表达，并且Bcl一2蛋白表达上调；予 再次缺血后，其梗死面积大大减小，半暗带内凋亡细胞明显减少。 局灶脑缺血预处理不影响Bax蛋白的表达。 2)局灶脑缺血预处理后产生的Bcl一2蛋白表达是一个主动 的过程，与缺血耐受的产生相一致。 3)局灶脑缺血预处理可以通过调节细胞内凋亡抑制基因Bcl 一2的表达诱导抗凋亡，从而启动内源性保护机制。 关键词：脑缺血；预处理；缺血耐受；凋亡；Bcl-2 入 ·2· ABS’115tACT Prface isa causeofdeathand inthe Strokemajor disabilityeldedy．A of”ischemictolerance”inanimals to subjected phenomenon