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肿瘤标志临床应用与研究（第二版） 万文徽 北京医科大学出版社 第一章 从实验室检测角度，肿瘤标志分类： 一是血清（血浆）肿瘤标志（serum/plasma tumor marker） 二是组织细胞肿瘤标志（tissue and cell tumor marker） 第二章 肿瘤抗原的加工核呈递 抗体呈递细胞（antigen－presenting cell，APC）是指体内的一类细胞能够捕获、吞噬、加工合处理入侵的抗原性物质，并将加工后的产物以抗原肽－MHC的形式表达在该细胞的表面，从而被相应的T细胞来识别。主要包括专职和非专职APC两类。前者包括巨噬细胞、树突状细胞、并指状细胞、朗格汉斯细胞和B细胞等，后者包括血管内皮生成细胞、成纤维细胞、某些病毒感染的细胞和肿瘤细胞等。 抗原呈递主要有两种形式：内源性抗原呈递和外源性细胞呈递。 人类CD1是第三类呈递分子，其将一些特殊的抗原、如一些细菌的脂类抗原成的给T－细胞的一些群体，从而可以保护机体免受某些特殊微生物的侵害，同时也参与这些T细胞群体的增殖、分化和成熟。在生物进化中，CD1基因的变异不大，具有高度保守性。 肿瘤抗原的研究方法 大多数的肿瘤抗原存在于肿瘤细胞表面，也有的在细胞质和细胞核内，但是与肿瘤免疫有关的抗原主要在细胞表面。目前主要采用体外方法研究人类肿瘤抗原，这些方法大致分为两类：细胞免疫学方法和体液免疫学方法。 细胞免疫学方法 肿瘤特异排斥抗原是指肿瘤细胞上特异表达的、能够被T淋巴细胞识别并参与T淋巴细胞活化的分子。CTL（细胞毒T细胞）、SEREX（血清筛选重组cDNA表达文库）、多肽洗脱法、表位预测法俩坚定肿瘤细胞内表达的抗原。 体液免疫方法 B细胞杂交瘤方法制备单克隆抗体。 肿瘤抗原的鉴定 肿瘤抗原的化学性质分为两大类，即糖蛋白和糖脂。目前大部分经鉴定的肿瘤膜抗原是糖蛋白。免疫印记（western blot）中要是蛋白质组分有效的从凝胶转移到固相纸膜上，缓冲液的PH值很重要，在电转移过程中，有些分子量并不是很大的蛋白质区带，即使延长时间也不能从凝胶转移到固相纸膜上，这是由于蛋白质在转移缓冲液中恰好处于等电点状态所造成的，因此应适当改变转移缓冲液的PH值。通常转移缓冲液中都会含有适量的甲醇，对于分子量较小的蛋白质，甲醇能促进其固定在纸膜上，但是对于分子量大的蛋白质，尤其是碱性蛋白质，在转移缓冲液中不宜加入甲醇，因为甲醇能将结合在碱性蛋白质上买你的SDS解离下来，而使其带正电荷或呈中性，蛋白质也就很难从凝胶中转移出来。 肿瘤抗原的应用 在肿瘤的研究和临床实践中，早期发现、早期诊断、早期治疗是关键。肿瘤标志在辅助肿瘤诊断、监测复发、判断预后和评价疗效等方面都有较大的应用价值。 到目前为止，绝大多数肿瘤相关抗原的血清学检测几乎均不能用于早期诊断及人群筛选，但是对于监视疗效和判断复发是具有作用的。 T/NT：肿瘤与非肿瘤比率 多特异性抗体：基因工程技术的发展。能够同时识别两种以上的抗原成为双特异性抗体，三特异性抗体或者四特异性抗体。 肿瘤抗原研究的展望 目前所认识的肿瘤抗原生物学功能有一下几类：1、参与信号传导；2、参与物质运输；3、参与细胞与细胞之间的反应；4、参与细胞与基质的反应；5、血型抗原等。 抗体的生物学特性及抗体的制备和应用 淋巴细胞中的T细胞和B细胞在机体内负责特异性免疫反应，针对外来侵袭的各种病毒、支原体、衣原体、细菌、真菌登致病原、异体组织、蛋白质或自身突变，细胞会产生免疫反应。T淋巴细胞通过所表达的T细胞受体（T cell receptor，TCR）识别机体各种细胞内表达，并由主要组织相容性复合物－I(majour histocompatibility complex－I, MHC-I)递呈抗原。在此识别过程中，淋巴细胞表达的共刺激分子也起着非常重要的作用。当巨噬细胞系统中的巨噬细胞、树突状细胞及朗格汉斯细胞等吞噬摄取外来的各种抗原后，在胞内通过各种吞噬酶体蛋白水解酶将抗原消化、降解并由吞噬细胞所表达的MHC-II分子将外来被降解的抗原递呈给T细胞，然后由T细胞传递给B细胞，或者由B细胞表面表达的B细胞受体识别这些抗原，B淋巴细胞就会产生抗体，即免疫球蛋白（immunpglobulin，Ig），抗体对抗原的反应是高度特异的。 轻链由两种类型：K型和入型。抗体的重链分子是免疫球蛋白的分类依据。重链分子可以分为：r、a、u、d和E五类。抗体分子的轻链和重链由若干个同源肽段分别折叠成类似的空间构型，构成Ig的功能区（domiain），每个功能区内包含约110个氨基酸残基，功能区内由来那个半胱氨酸，之间间隔60个aa，这两个氨基酸形成的链内二硫键使得功能区发生折叠，成为一个环状结构。同一个Ig分子的两条轻链必定是同型。 在轻链和重链每一条链的可变区重，各有三个