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广东农业科学 2011 年第 6 期 1
鳜鱼TCR 基因实时荧光定量RT-PCR
检测方法的建立
1,2 2 2 2
明皇 常藕琴 石存斌 淑勤
1. 连海洋 学生命科学与技术学院袁 辽宁 大连 116023曰
2.中国水产科学研究院珠江水产研究所袁 广东 广州 510380冤
要 根据 GeneBank 上鳜鱼 TCR 基因序列设计并合成特异性引物袁以鳜鱼茁-actin 基因为内参袁采用 RT-PCR 方法从鳜
鱼的胸腺总 RNA 中扩增得到鳜鱼 TCR 和茁-actin 基因袁将目的片段纯化后克隆到 PMD18-T 载体上袁测序鉴定遥 以阳性质粒为标
准品袁采用 SY BR Green 域染料法进行实时荧光定量 PCR 扩增袁构建标准曲线并进行溶解曲线分析遥 结果表明袁鳜鱼 TCR 基因的
2 8 2
Ct 值与标准品稀释度在 10 耀10 拷贝/滋L 范围呈良好的线性关系袁r 达 0.99 以上袁溶解曲线分析表明产物为特异的单峰遥
关键词 鳜鱼曰 TCR 基因曰 实时荧光定量 PCR
中图分类号 S965.211 文献标识码 A 文章编号 1004-874X 2011 冤06-0001-05
Establishment of a real-time fluorescent quantitative RT-PCR
assay for detection of Siniperca chuatsi s TCR gene
1,2 2 2 2
W U Ming-huang , CHANG Ou-qin , SHI Cun-bin , W U Shu-qin
(1.Life Sc ie nce and Technology Departme nt,DaLian Fishe ries Univ ersity,Dalian 116023,China;
2.Pearl Riv er Fishe ries Research Institute ,G uangzhou 510380,China)
Abstract: According to the Siniperca chuatsi 爷s T cell receptor alpha(TCR ) and 茁-actin mRNA sequences available in GenBank,the
primers were designed for developin
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