基于双纳米金探针杂交法检测HBV DNA.pdfVIP

V01．33 高等 学校 化 学 学报 NO．7 2012年 7月 CHEMICALJOURNALOFCHINESE UNIVERSITIES 1420 ～1425 基于双纳米金探针杂交法检测 HBVDNA 邢亚斯 ，邹能利 ，毛红菊 ，徐 霞 ，葛玉卿 ，金庆辉 ，赵建龙 (1．中国科学院上海微系统与信息技术研究所传感技术联合国家重点实验室，上海 200050； 2．郑州大学药学院，郑州 450001) 摘要 利用双纳米金探针结合基因芯片平台建立了一种检测乙肝病毒基因(HBVDNA)的新方法．根据HBV DNA的保守序列设计捕获探针和信号报告探针，通过一对互补的纳米金检测探针的双杂交法对 HBVDNA 进行信号放大，最后进行银染 ，达到对 HBVDNA的可视化检测．该方法的灵敏度高，可检测 10fmol／L的 HBVDNA，且能在 1．5h内完成检测．其具有的快速、高灵敏度及低成本等优势使其有望发展成为一种检测 HBVDNA的新方法． 关键词 双纳米金探针 ；杂交；基因芯片；银染；乙肝病毒基因(HBVDNA) 中图分类号 0657．39 文献标识码 A DOI：10．3969／j．issn．0251-0790．2012．07．010 乙型肝炎病毒 (HBV)是指引起人类急、慢性肝炎的DNA病毒．我国的乙肝病毒感染率约为 60％～70％，有 1亿多人携带乙肝病毒，其中乙肝患者有 3000多万，是严重威胁人类健康 的传染病之 一 ． 因此，乙肝病毒基因检测对早期的诊断和治疗具有极其重要的意义 ． 目前用于乙肝病毒基因检测的方法主要有竞争聚合酶链式反应 (PCR)法、荧光定量PCR法、酶联 免疫吸附法、荧光标记物法和PCR酶联化学发光等 J．实验室诊断则主要依赖于血清特异性抗原抗 体 (ELISA)检测和乙肝病毒基因(HBVDNA)检i贝4，前者是临床诊断 HBV的传统方法，后者多采用定 量PCR技术提高HBV的检出率，但其检测成本较高，在一定程度上限制了其应用．以上方法各有其 优缺点，所用的仪器设备及试剂品质等条件不同 ，得出的检测结果也各不相同． 纳米金粒子(AuNPs)由于具有 良好的生物相容性、较小的颗粒直径 以及较大的比表面积等表面特 性优势，已被用于寡核苷酸的功能化修饰，并在一系列的生物检测领域得 以应用 ，其 中纳米金探 针结合银粒子的方法在核酸检测中也有广泛的研究．Tatonl10]和Storhoff等u 利用纳米金检测探针通 过待检测的靶DNA与固定在固相支持物上的捕获探针杂交，再用银染增强使信号放大，从而形成可视 的点阵来检测病毒DNA．此方法与传统的荧光检测方法相比，灵敏度有所提高且操作过程简单省时， 适合快速检测，但其检测灵敏度还有待进一步提高．Cao等 ¨在芯片表面通过核酸杂交形成纳米金标 记的探针，建立 了结合银粒子增强拉曼反射的电化学检测方法来检测 DNA和 RNA，检 出限达到 20fmol／L，使检测灵敏度大大提高．Xiong等 利用纳米金探针在其互补DNA存在时与银粒子之间的 相互作用产生的颜色变化来检测该DNA分子，得到了良好的效果，此方法简单易操作，无需昂贵的仪 器设备． 本文 以基因芯片为平台，基于纳米金探针和银染的方法开发了一种基于双纳米金探针杂交的核酸 检测方法．通过一对互补的纳米金检测探针的杂交，使检测信号得到2次放大，最后进行银染增强， 从而形成能在显微镜下清晰观测的黑色点阵，根据点阵灰度 的强弱，可直观得到HBVDNA的检测灵 敏度．该方法大大提高了HBVDNA的检出效率及检测的灵敏度，且快速、简便、成本低，是诊断HBV 感染的一种有效手段．检测过程及原理如图1所示． 收稿 日期：2011-08．22． 基金项 目：上海市科学技术委员会纳米专项 (批准号：11nm0505800，1052nm061000)和国家 自然科学基金 (批准号 资助 联系人简介：毛红菊，女，博士，研究员，主要从事生物传感器及纳米技术在重大疾病诊断治疗方面研究 E—mail：hjmao@mail．sim．ac．cn