建立反向PCR检测HIV-1整合位点的方法.pdfVIP

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2017-09-04 发布于湖北
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建立反向PCR检测HIV-1整合位点的方法.pdf

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2009往 10月首都医科大学学报 0ct．2009 第30卷第5期 JournalofCapitalMedicalUniversity VolJ30 No．5 [doi：10．3969／j．issn．1006-7795．2009．05．014] · 艾滋病基础研究及治疗 · 建立反向PCR检测 HIV-1整合位点的方法焦艳梅画伟李娟刘志英陈德喜李在村张彤吴昊 (首都医科大学附属北京佑安医院感染科) 高效抗反转录病毒治疗(highlyactiveanti．retroviral 表 1 研究对象情况 Tab．1 Generaldataofthesubjects therapy，HAART)可降低艾滋病的发病率和死亡率，使感染者血浆中HIV一1RNA降至常规方法检测不到的水 Item Healthcontrol HIV一1patients Numberofcase l5 24 平，但用敏感度高的方法仍可检测到病毒基因和低水 Age／year 42(22～55) 4l(23～55) 平的病毒复制，这是因为存在HIV—I潜伏库，含有整合 Gender／Male：Female 9：6 13：1l HIVDNA的静止性CIM T细胞是最主要的HIV．1潜伏 CD4counts／(cell·IxL ) 一 310(15～895) Virusload／(copies·mL ) 一 26368f415～3902191 库。SilicianoJD等报道这种潜伏库的半衰期大概 Note：Thenumbersinthetablearemedians： “一 ”：representsnotdone．为44个月，这种状态下免疫反应或抗病毒治疗对其不起 ThermalCyelers，美国)，琼脂糖凝胶电泳仪 (DYY一6C 作用，并且成为抗病毒治疗不能完全清除病毒的主要原型，北京六一仪器厂)，数码凝胶图像处理系统 (Gel 因 1 。因此，研究整合型ⅢV一1及其整合位点对于探 MediaSystemTanon一1600R上海天能科技有限公司)。讨HIV的致病机制及最终清除病毒具有重要的意义。 DNA提取试剂盒 (德国QIAgen公司)，DNA纯化试剂反向PCR(inversePCR，IPCR)技术可以对已知盒 (德国QIAgen公司)。标准相对分子质量 DNA(宝 DNA片段相邻的未知序列进行扩增和研究。此方法在生物工程(大连)有限公司)，PCR扩增试剂 Taq酶等分子生物学研究中应用广泛，可以检测病毒、转座子等 (上海生物工程技术服务有限公司)。在基因组中的整合位点，克隆基因的邻接序列以及建立 2)纯化 CD4 T细胞：首先分离外周血单核细胞基因组步移文库等。作者利用PstI能