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基因芯片在呼吸系统感染性疾病诊断中的应用 范国宇 李立 我们的生活空间中存在着各种各样的致病原， 2呼吸系统感染性疾病的诊断现状 对人们的生活造成了很大的危害。其中，细菌仍然 目前按照病原学对肺炎进行分类仍很困难“]， 是人类健康的最大敌人。 由国内众多呼吸病专家参考国外类似指南并结合国 呼吸系统，由于其解剖学特点，容易受到细菌的 内特点制定出来的“社区获得性肺炎(CAP)与医院 侵犯，并且呼吸道细菌种类繁多，变异力强。抗生素 获得性肺炎(HAP)诊断和治疗指南”，将肺炎分为社 的发展虽一度使呼吸系统感染性疾病的发病率有所 区获得性肺炎与医院获得性肺炎两类，这一分类最 下降，但近几年来，呼吸系统感染性疾病的总病死率 为实用，比较符合临床实际情况。 2．1 CAPES] 不再下降，甚至有所上升，尤其是经济落后的国家与 是指非住院患者发生的急性肺实质 地区的儿童肺炎，人口老龄化所致的老年人肺炎以 感染。感染病原体常见的有[4]：肺炎链球菌，流感嗜 及多种严重基础疾病或免疫功能低下并发的肺部炎 血杆菌，需氧革兰阴性杆菌，卡他莫拉菌等。一旦 症。据WTO统计全球人口死因顺序，急性呼吸道CAP的诊断确定即应考虑微生物学的诊断。目前 感染仅次于心血管疾病居第2位。肺部感染性疾病 常用的检查手段有：①常规的快速试验，包括咳出痰 的发病率与死亡率的升高和病原体变迁，病原学的 的革兰染色以及抗酸染色。②呼吸道分泌物的培养 诊断困难，不合理使用抗生素导致细菌耐药性增加 加药敏，包括咳出痰，经纤维支气管镜获取的标本。 等因素密切相关。因此找到一种快速诊断依据，鉴 经胸壁的肺吸引物等。目前最为常用的还是痰检， 别何种细菌感染，快速而合理的应用抗生素具有重 但是由于诸多因素影响，使痰检的阳性率降低，包括 要的意义。 前期的抗生素使用，标本质量低，运送耽搁以及由于 1基因芯片技术及其应用原理 上呼吸道菌丛的污染等。③体液检查，血液及其它 可能的感染性体液的革兰染色和培养，包括胸腔积 基因芯片又称DNA芯片[1]，DNA阵列。寡核苷 酸微芯片，是指将许多特定的寡核苷酸片段或基因 液、关节液、脑脊液。通过以上检查可在24～72小 片段作为探针，有规律的排列固定在支持物上，然后 时内明确病因诊断，对指导进一步的治疗非常有用。 与待测的标记样品基因按照碱基配对的原理进行杂 ④血清学检查，常用于军团菌，支原体等的检查，这 交，再通过激光共聚焦荧光监测系统对芯片进行扫 些病原微生物的抗体达到诊断滴度需要的时间较 描，配以计算机系统对每一探针上的荧光信号做出 长，而且即使达到诊断滴度也不能肯定是现症感染， 比较和检测，从而迅速得出所要的信息，简单的说基 往往用于流行病学调查和回顾性诊断，对于急性感 因芯片的实质就是高度集成的寡核苷酸阵列。如果 染的意义有限。⑤其它检查方法，如对流免疫电泳， 要对细菌，病毒等病原体的感染进行诊断，只需在病 免疫荧光等，因为价格昂贵，费时而且敏感性和特异 原体基因组中找出一段特异的序列，这一特异序列 性较差很少使用。PCR技术是近年来发展起来的快 速诊断方法，我国在这方面进行了许多研究，如肺炎 必须是细菌的保守性序列，如16SrRNA[2]， 支原体，结核分支杆菌等感染的检测，但是因为敏感 23SrRNA[3]，扩增后由一个探针就可诊断，基因芯片 在感染性疾病诊断上的价值在于有可能对多种乃至 性和特异性均较差，要真正用于临床检验还需要做 ’ 全部病原体以及这些病原体的耐药性，变异性等等 较多的工作。 2．2 HAPE61 情况，通过一张芯片同时诊断出来。并且具有灵敏 患者入院时不存在，也不处于感染潜 度高，特异