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酵母感受态细胞的制备及酵母转化
酵母感受态细胞的制备 转化规模
YPDA 培养基平板上活化酵母菌 小 大 文库
接直径2-3ml 的单克隆1 个或多个于1ml YPDA 或
a
SD 培养基中（最好选用四周之内的酵母菌落）
涡旋打散菌体
转移到表中右面所示体积的YPDA 或SD 培养基中 50ml 50ml 150ml
30℃，250rpm ，振荡培养16- 18h，至OD600 大于
1.5
转移过夜培养的培养物于表中右面所示体积的 300ml 300ml 1000ml
YPDA 中，加入的量要足够使1 升培养物中OD600
约达0.2-0.3
30 ℃,230-270rpm ，振荡培养 3h 至 OD600 约
0.5(0.4-0.6)
50ml 离心管，室温 1000×g，离心5min 收集菌体
弃上清，用灭菌的 1×TE 或灭菌蒸馏水重悬菌体 25-50ml 25-50ml 500ml
室温，1000×g，离心5min
弃上清，用灭菌的 1×TE/LiAc 重新悬浮菌体 1.5ml 1.5ml 8ml
准备PEG/LiAc 溶液 10ml 10ml 100ml
注：酵母转化分为顺序转化和共转化。a 在顺序转化中，进行第二次转化时，用 SD-Trp 培养基；
上面表中所标出的培养基及试剂的体积不是固定不变的，可根据实验中的实际情况调整，如
PEG/LiAc 溶液，转化时只用60ml，若准备100ml 就很浪费。
酵母转化 小 大 文库
在指定管中混合下列成分 1.5ml 50ml 500ml
DNA-BD/诱饵a 0.1μg 20- 100μg 0.2- 1.0mg
AD/文库 0.1μg 10-50μg 0.1-0.5mg
Herring testes carrier DNA(鲑鱼精DNA) 0.1mg 2mg 20mg
加入酵母感受态细胞，涡旋混匀 0.1ml 1ml 8ml
加灭菌的pEG/LiAc 溶液，涡旋混匀 0.6ml 6ml 60ml
30℃,200rpm ，振荡培养30min
加DMSO ，温柔混匀或旋转（注：此步一定不要涡旋） 70μl 700μl 7.0ml
42 ℃热击15min，大规模和文库规模的需要不断旋
转混匀
冰上放置 1-2min 5S(14krpm) 5min 5min
(1000 ×g) (1000 ×g)
室温离心，弃上清
b c
用 1×TE 重悬 0.5ml 1.0ml或10ml 10ml
涂板，根据不同严谨度涂不同缺陷平板，低严谨度的涂 SD-Leu-Trp 二缺板；中严谨度的涂
SD-Trp-His-Leu 三缺板；高严谨度的涂S
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