真核生物染色体超级结构研究①Ⅰ.家猪中期染色体超级结构研究.pdfVIP

遗 传 学报，21(6):431- AcraGeneticaSinica 真核生物染色体超级结构研究① I，家猪中期染色体超级结构研究 詹 铁 生 （西北农业大学畜牧系 陕西 712100) 摘要 用自行设计的多级光学放大系统，观察到染色体上15nm大小的细微结构，用以研究 致密状态的中期染色体超级结构，结合细胞化学技术，用特异性染色显示 DNA一核蛋白、酸性 骨架蛋白在染色体中的构象。 本文发表了家J染色体超级结构的天然形态— 螺旋构型照 片，描述了染色体螺旋结构的特征及其参数，提出了染色体超级结构的动态螺旋模型。 关钮词 染色体，超级结构，有丝分裂 染色体结构是世界上近几十年的重大研究课题，虽然科学技术飞速发展，生物科学已 经处于分子水平，可以测定基因的内部结构，但是对于遗传物质载体— 染色体的结构仍 然不够清楚。 染色体的初级结构虽然比较清楚，分歧依然很多习〔，至于染色体的超级结构更是众说 纷纭，其主要模型有：螺线管模型 S（olenoidalmodel)t93，纤维折叠模型 (Foldedfibre model)[81,辐射环模型 R（adioloopmodel)),辐射环螺旋模型 (Ridio--loop-coilcoe- x1stingmodel)，和非组蛋白骨架模型 (Non-histonscaffoldmodei)EIII等。这些模型 主要来自对染色体的变形处理，能否代表天然结构，疑问颇多。 研究染色体结构的主要困难是：染色体结构易于变化，在标本制备过程中，不易察觉 的理化因素就会使染色体结构剧烈变化181［；另外，缺乏合适的研究技术，普通光学显微镜 由于放大倍数和分辨率的限制，看不到染色体的亚显微结构；电镜技术由于中期染色体很 致密，难以观察，需要处理标本，使染色体结构松散。如何观察致密状态的中期染色体超 级结构，就成为解决这个问题的关键。作者在研究中发现了一种能够反映致密染色体超 级结构的光学亚显微技术，用以研究中期染色体的超级结构。 1材料和方法 1.1 分裂期细胞的准备 从猪的耳静脉或颈部静脉采血，直接注人培养瓶，培养基5 ml用 RPMI1640千粉 （日本株式会社）配制，加人小牛血清、L一谷氨酞胺、青霉素、链霉 素、PHA及肝素，在38.5℃培养72小时，收获前4小时加秋水仙素 最（终浓度0.02- 0.04}Lg／MI). 1.2 染色体标本制作 采用外周血淋巴细胞染色体标本制片技术2，〔制作染色体标本。 在37cC0.075mo1/LKCl水溶液中低渗处理20分钟，甲醇：冰醋酸(3:1)固定3次以上， 空气干燥法制片。 1.3 染色 Giemsa染色，用4外Giemsa的 PBS液染色，无离子水或自来水冲片，空 ①本文于1993年7月13日收到。国家自然科学基金资助 432 遗 传 学 报 21卷 气千燥。 银染：用 Ag-I法染色2,7.〔，50多AgN03水溶液 1m1，加1＿-3滴3务中性甲醛液， 在”-600C染色数小时，至染色体标本清楚显示。 1.4染色体标本的观察拍照 用OlympusBH-2型显微镜及自动曝光系统观察拍照 常规光镜片；染色体超级结构研究，采用自行设计的多级光学显微放大系统，显示染色体 的亚显微结构。 2 结果与分析 为了反映有丝分裂中期染色体超级结构的自然形态，用猪的静脉血做全血外周血淋 巴细胞培养，所用的细胞培养技术及染色体标本制备技术，如上所述，均为细胞遗传学常 规技术，研究结果如下。 2.1Giemsa染色的一般图像 图版 1-1是猪的8号染色体的光镜照片，放大1600 倍。这是一条中着丝粒染色体，核仁形成区位于着丝粒短臂一侧，两条姊妹染色单体在着 丝粒区连接在一起，完全保持着中期染色体致密结构的形态特征。图版1-2是上图染色体 标本多级光学显微放大的图像 （x16000)，它具有图版I-1的外形特征．，同时还显示出这 条染色体的超级结构，染色单体由直径约为25nm的纤维规则排列而成，周围是一些浓淡 分布不匀的模糊物质— 本文暂时命为基质，染色体形状由纤维构形确定。 由图版1-4可以