志贺氏菌链霉素依赖菌株回复突变的研究II. 回复突变株的致病力.pdfVIP

第6卷 第斗期 遗 传 学 报 Vol.6 ‘No.4 1979年 12月 ACTA GENETICA SINICA Dec． 又979 志贺氏菌链霉素依赖菌株回复突变的研究 II.回复突变株的致病力 杨正时 张秀文 卫（生部药品生物制品检定所，北京） 志贺氏菌链霉素依赖菌株 {Streptomycin-dependentShigellaStrains以下简称 Sd）能普 遍地发生对链霉素不依赖的回复突变现象[11，并伴随有其它生物学性状的改变。目前 Sd 不仅作为痢疾减毒口服活菌苗株在现场人群中使用，而且布氏菌、伤寒、霍乱等其它传染 病的致病菌也以此作为减毒途径而进行研究2-‘41因此，回复突变株侣rev）是否会发生毒 力改变而返祖为有毒菌株，这在活菌苗使用中是一个共同关心的问题。本文着重研究回 复突变株的毒力，进一步探讨Sd菌苗株的安全性和试图建立Sd菌苗株安全性的实验室 鉴定方法。 材料和方法 菌株 同前文1]〔。为了进行比较，还采用了sd株的原始出发株，若千标准有毒菌 株，以及非sd减毒菌株 构（赊酸盐斜面传代减毒株）。 方法 1．小白鼠LIa＊ 用无菌生理盐水，洗取37℃培养18-20小时的营养琼脂斜面上 的菌苔，用毛细管反复吹打使成均匀菌悬液，作活菌计数。同一浓度菌液取其一份，水浴 加热至1000C,30分钟。取体重为16--18克的小白鼠10只，腹腔注射不同浓度菌悬液， 每只0.5毫升，观察三天。用 Reed-Muench法计算 LDo5值。 2．鸡胚最小致死量 于9-10日龄鸡胚尿囊内接种不同浓度 （10倍连续稀释）菌 液。.1或0.2毫升，逐日检查存活，观察3天。 3.豚鼠眼毒力试验 18-20小时的新鲜斜面菌苔一白金耳 （＞100亿），涂抹豚鼠 结膜囊，每一Sd株任挑1-4个回复突变菌落 株（）试验，部分回复突变株在10%羊血琼 脂斜面传代后进行角膜感染试验，部分sd株在有些试验中于眼结膜囊感染接种后滴加浓 度为每毫升5000微克的链霉素，每日二次，共三天，一般观察 14天 部（分7天），出现角膜 炎者为阳性。部分豚鼠在病后 1-3天将眼球与其附属器作病理组织学检查。 4.HeLa细胞感染 小方瓶培养三天的HeLa细胞经加胰酶消化后，用青、链霉素 的199液20毫升洗下，再用吸管吹打均匀，分装于含有飞片的小瓶中，每瓶1毫升 S（“株 试验时加链霉素400微克／毫升），静止培养36-40小时后，吸去培养液，用汉克氏液 本文于1978年3月13日收到。 4 期 杨正时等：志贺氏菌链霉素依赖菌株回复突变的研究 11. 397 (Hanks）洗三次。从新鲜斜面上刮取菌液，用199液配成10亿／毫升菌液 （比浊浓度）。 在不含有抗菌素的1毫升199液中加入上述菌液0.1毫升，混匀后加人培养瓶中，于370C 中培养，每2-3小时换用汉克氏液，7--8小时后取出飞片，甲醇固定，姬姆萨染色镜检。 结 果 一（）小白鼠LD5。值 南斯拉夫sd株 5（1274）及其 Sre，株 5（127劝和同一血清型标准毒株 (51573)，按活 菌计数的小白鼠LD50值可明显地分为三类 表（1)a Sd株LD5。为34.9亿，毒株2.2亿，Srev株介于二者之间。Sre，株的不同传代菌株的 LD50值均较接近，为7.6-10.4亿。若按浊度计，则也相似。唯因含有死菌，LD5。值较高。 三种类型菌株加热死菌的LD5。值差别不明显。若以活菌LD。值比较菌株的毒力，则 Srev 株毒力比毒株51573低约4倍S.Sd株低约 16倍。 表151274Sd株及其Srer株小白鼠毒力 TableIVirulenceof51274SdstrainanditsSri`straini