制作转基因动物的显微注射技术.pdfVIP

遗传 HEREDITAS(Beijing)10(5):40--431988 实 验 技 术 制作转基因动物的显微注射技术’‘ 与 方 1C14zz- 李 光 三 （中国科学院发育生物学研究所，北京） 转基因动物 T（ransgenicanimals）是指 外源基因 体细胞和生殖细胞40基因组内，含．有用实U,方 固定针 法导入的外源目的基因的动物。」转基因动物的 获得，大大地丰富了基因工程的研究内容，它 原核期的／细饱 注射针 胚胎 为研究高等动物基因表达调控的分子机理提供 注射的胚胎 了有效的途径。由于这种系统不仅可以表达多 移入钧卯管 肤和蛋白质的产物作为医疗药物的生产途径， 而且外源基因的表达还可以引起动物表型的改 假孕鼠 分子杂交检侧DNA 变，并能传递至后代，因此为创造新品种提供了 可能性。 图1 制作转基因小鼠示慈图，引用GordonI 转基因动物的制作有三种途径，(1)将外 阴道栓的待用。 源目的基因直接用显微注射法导人受精卵的 3.受精卵雌鼠的选择— 如果无特殊遗传 核内；(2)以反转病毒 (Retrovirus）为载体 背景的要求，一般用杂交F，小鼠卵较为理想。 感染早期胚胎；(3)将外源基因导人胚胎干细 我们曾用过黑毛色的雄性 CBL/6d小鼠与白 胞 (EK）或畸胎瘤干细胞 (EC)，再用这种细 毛色的昆明白小鼠交配，杂交Fi代小鼠全部是 胞作嵌合体。目前以第一种方法最为有效而被 黑色。该杂交F，受精卵注射外掠DNA之后， 广泛采用。 图1表示 “转基因小鼠”的制作过 移人假孕昆明白鼠中，出生的幼鼠应全是黑色。 程，主要包括实验鼠胚胎的准备，显微注射和胚 如果其中有白色幼鼠，证明绪扎输精管的雄鼠 胎移植等步骤。 仍有生育能力。这样不仅可排除结扎输精管失 声（）实验鼠的准备 败的因素，而且杂交胚胎的发育能力一般耐受 1．不育雄鼠的制备— 选择大于6周龄的 性较强，有益于提高移植胚胎的出生率。 成年健壮雄鼠，结扎输精管。2至3周后待其 4．胚胎的获取— 受精卵取自超数排卵或 恢复健康与性成熟的雌鼠交配，反复交配二次 自发排卵的小鼠。如作超数排卵，选5-6周龄 或三次，经检查雌鼠有阴道栓但均不怀孕产仔， 的雌鼠下午4:00注射孕马血清．(PMS)5I.U., 证明结扎输精管的雄鼠确无生育能力，方可使 48小时之后注射人绒毛膜促性腺激素 (HCG) 用。 4或5I.U.。第二次注射后即将雌鼠放人雄鼠 2．假孕鼠的制备— 作为注射后卵子的受 笼中交配，次日晨选出有阴道栓的雌鼠待用。 休之用或称养母 F（ostermother)，它的生殖 小鼠排卵时间与光照和黑暗交替的时间有 系统的生理状态应与移进卵的发育阶段处于同 步化，从而为移植的胚胎提供了着床和继续发 LiGuangsan:TechniqueofMicroiniectionfor 育的一切条件。将选好的母鼠放入结扎输精管 M%kingTransgpnicAnimal