一例t(Y;15)并t(14;21)复合易位的细胞与分子遗传学研究.pdfVIP

遗传 学 报，20(6);488--492),1993 滩ctaGeneticaSinica 一例c(Y;is）并t(ia;ai)复合易位的细胞与 分子遗传学研究＊ 石玉平马绍武王玉梅高·春生叶丽珍程在玉 （中国医学科学院基础医学研究所，北京 100005) 本文对一例生育过先天愚型儿的个体进行了细胞与分子遗传学研究。 发现先证者拥有 x(14;21)及一个短臂增大变异的15号标记染色体。通过G一显带、c一显带、Q一显带、硝酸银染 色及Y染色体长臂异染色质区特异探针 PY3.4对先证者基因组 DNA的斑点杂交和中期染色 体的原位杂交，证实变异部分由丫染色体长臂异染色质区易位所形成，从而排除了巨大随体沟 存在或其他染色体参与重排形成变异的可能性。结果表明，常规显带与染色体原位杂交等分 子生物学技术相结合对于鉴定人类染色休的微小结构畸变具有重要的应用价仇。 关键词 复合易位，标记染色体，原位杂交，斑点杂交 先天愚型由LangdonDown最先发现，在新生儿中占1.5痴左右，易位型占本综合 征的3--4%U3，其中以t(14;21)最为常见。本文14/21平衡易位携带者的检出为先证 者生出先天愚型儿找到了病因。 在人类，Y染色体长臂异染色质区与常染色体尤其是D,,G组染色体的易位比较常 见21，以往多经过Q一显带和C一显带而加以确定。然而某些近端着丝粒染色体的巨大随体 在氮芥哇叮因 Q（M）染色中也显示荧光，因此只有借助于X染色体特’；户的分子探针才能 对这类1一常染色体易位进行准确鉴定。本文先证者拥有一个短臂增大龙异的15号标记 染色体，变异部分在．G-1C一显带中均为深染，硝酸银染色具有正常的Ag-NOR,QM染 色变异部分显示荧光且在间期核中有荧光小体出现；Y染色体长臂异染色质区特异探针 pY3.4斑点杂交的阳性结果和原位杂交的高度特异性证实该标记染色体为Y与15号染 色体易位形成。实验说明常规显带与原位杂交等分子生物学技术相结合在鉴定染色体的 微小结构异常中具有广阔的应用前景。 病 例 报 告 先证者，女，27岁，因分娩一先天愚型儿而就诊。该患儿为女婴，第一胎，足月顺产， 休重2.6kg,临床诊断为先天愚型，生后三天死亡。先证者为第三胎，第三产，月经正常， 非近亲婚配，无流产史。在孕期无患病及用药史，无有害物质接触史。其夫28岁，身体健 康。先证者父母均57岁，身体健康，母亲曾因“劳累”流产一次。先证者有两姐，无流产 史，皆有一正常小孩。体检：心肺未闻及异常，表型为正常女性，无男性性征表现。 本文于1992年4月24日收到。 ＊卫生部基金资助课题。青岛计划生育科研所张鸿岩同志协助工作，特此致谢。 ‘期 石玉平等：一例 t(Y;15）并 t(14;21)复合易位的细胞与分子遗传学研究 今色9 材 料 和 方 法 （一）染色体标本的制备： 取先证者及其丈夫的外周血淋巴细胞培养72小时，常 规制备染色体标本。G-,C-,Q一显带及银染均按本室常规方法进行。 其他家庭成员不予 合作，未能进行染色体检查。 二（）探针制备： 人类Y染色体长臂末端重复序列探针 pY3.4 （由美国旧金山大 学医学院Y.-F.C.Lau博士惠赠）经常规方法转化、扩增和提纯，回收3.4kb的探针片 段，以缺口平移法标以’H1131，探针的比活通常为0.9-1.3X107cpm/pg，以随机引物延 伸标以 ’2P-a-dCTPE，探针的比活通常为3X108cpm/zlgo 三（）斑点杂交：按照Lautai介绍的方法进行。提取先证者及正常男女对照基因组 DNA,碱变性后真空抽滤点样于硝酸纤维素膜上、中和、烤膜固定。DNA滤膜在非甲酸 胺体系中，与经 ’zp标记的pY3.4探针 “℃杂交过夜；洗脱、压片、曝七及冲洗均以常规 方法进行。 (92)染色体原位杂交及放射自显影： 染色体标本按 ChengZaiyu[3，报道的方法 稍加修改进行杂交。先经系列乙醇脱水，70外甲酞胺变性，滴加含有经热变性 ’H标记 探针pY3.4的杂交混合液，于37℃杂交16小时。经50务 甲酞胺洗脱，系列乙醇