DNA甲基化的电化学研究.pdfVIP

DNA 甲基化的电化学研究 * 王颇，武海，戴宗 ，邹小勇 中山大学 化学与化学工程学院 广州 510275 *联系人：Tel.: +86 20 E-mail: daizong@mail.sysu.edu.cn [1] DNA 甲基化是表观遗传学的重要研究内容 。异常的DNA 甲基化状态与人 [2] 类生命中许多疾病有关，尤其是癌症 。DNA 甲基化的检测对于癌症的早期诊 断以及表观遗传学的机理研究具有重要的理论意义和实用价值[3] 。本文以 DNA 碱基的直接电催化氧化为基础，建立了DNA 甲基化电化学检测的新方法。 1. 胞嘧啶（C ）和5- 甲基胞嘧啶（5-mC ）在电极表面的直接电位分辨 我们考察了5-mC 和C 的混合物在不同电极表面的电化学氧化，结果如图. 1 所示。它们的混合物在裸的GCE 表面呈现出一个重叠的氧化峰，峰电位大约是 1.29 V （曲线a ）。由于5-mC 和C 的氧化峰相互重叠，我们不能得到它们各自的 氧化信号。然而在MWNTs/Ch/GCE （曲线d ），重叠的氧化信号被分离成两个独 立的、形态良好的氧化峰。5-mC 和C 的氧化峰电位分别是1.16 V 和1.33 V，直 接电位分辨达到了 170 mV，因此可以实现它们的电位识别和同时测定。尽管 5-mC 和C 在Ch/GCE 和MWNTs/GCE （曲线b 和c ）也可以实现电位分辨，但 是MWNTs/Ch/GCE 表现出更高的灵敏度和更好的分辨能力。 Fig. 1. Background-subtracted DPVs of bare GCE (a); Ch/GCE (b); MWNTs/GCE (c) and MWNTs/Ch/GCE (d) in 0.1 M pH 7.0 PBS containing 50 µM 5-mC and C. 2. 小牛胸腺DNA 样品的甲基化评估 小牛胸腺DNA 样品在MWNTs/Ch/GCE 上的示差脉冲伏安曲线如图2 （A ） 中的曲线a 所示。鸟嘌呤（G ）、腺嘌呤（A ）与C 的氧化信号彼此分离，氧化峰 电位分别是0.67 V，0.94 V 和1.33 V，而5-mC 与胸腺嘧啶（T ）的氧化电流相 互重叠，因此T 的存在为DNA 甲基化的检测带来了严重的干扰。然而根据碱基 互补配对原则，在双链DNA 样品中，T 的物质的量与A 的物质的量相等。虽然 T 的氧化电流与5-mC 发生重叠，但是A 的氧化电流与其它碱基可以实现良好的 分离。因此，我们根据A 的含量可以得到等量A 与T 所产生的氧化信号，结果 如曲线b 所示。接下来，利用曲线a 的氧化信号减去曲线b 的氧化信号，从而可 以扣除DNA 样品中A 和T 的氧化电流，得到图2 （B ）所示的电流曲线。通过 以上过程可以扣除T 的干扰，得到5-mC 和C 独立的氧化信号，5-mC 和C 的检 测结果分别为2.956 mg g-1 和37.85 mg g-1 ，C 的甲基化水平为6.483% 。 -1 Fig. 2. (A) Background-subtracted DPVs of 0.10 mg mL calf thymus DNA (a) and equivalent A and T (b) at MWNTs/Ch/GCE in 0.1 M