定点突变改善红色荧光指示蛋白玉米尿卟啉原Ⅲ甲基化酶的水溶性研究.pdfVIP

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2017-09-03 发布于重庆
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定点突变改善红色荧光指示蛋白玉米尿卟啉原Ⅲ甲基化酶的水溶性研究.pdf

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卷期生物工程学报 ! ! %’ (! ) (! 年月 !##$ !#$%% ’()*$+, (- .#(/%0$(,(12 *+,-. !##$ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 定点突变改善红色荧光指示蛋白玉米尿卟啉原! 甲基化酶的水溶性研究 !#$%’( )*’ +%,-./,/)0 %1 23/4’ 5$%#%$#*0$/6%7’6 ! 2’)*0,)$3681’$38’ 38 )*’ 9’( :,-%$’8;’6) !6(/;3)%$ .0 +/)’(/$’;)’( 2-)37’6’8/8 潘海韵，程郢，朱苏文，范军，， F) O+1JPAD GOL)Q P1DC ROS 4AJT0D +D3 U) VAD 安徽农业大学生命科学学院，合肥 !##; ，，，， 30((, (- 4#- % 30#%$0% 5$)# 51*#0),/)*+, 6$#7%*#/2 8%- %# !##; !#$+ 摘要尿卟啉原甲基化酶是一种新型的红色荧光指示蛋白，但是，在大肠杆菌重组表达的4S*= 水溶性相对较低，限制了 ! 它的应用范围，而且对于结合在蛋白的色素组分尚不清楚。利用定点突变产生玉米尿卟啉原!甲基化酶WII/X WIKQ 双突变体和突变体，两种突变体分别在大肠杆菌中重组表达，一步纯化。紫外可见光谱扫描和质谱分析确定从纯化的 W9;; )1J)= WII/XWIKQ 双突变体蛋白分离的色素组分。WII/X WIKQ 双突变体在大肠杆菌细胞内有酶活，而W9;; 突变体胞内酶活丧失。结合蛋白的主要组分为三甲基化咕啉。纯化的双突变体蛋白水溶性增加，为提高它作为荧光指示蛋白检测外源融合蛋白的水溶性打下基础。关键词尿卟啉原!甲基化酶，玉米，定点突变，三甲基咕啉中图分类号文献标识码文章编号（） YKZ; [: 9###J#;9 !##$ #!J#!#;J#: （） =.8)$3;) 3 J+30DB’706.1D1D0J3050D30D6 A,5,5.B,1DC0D ! 706.B’6,+DE0,+0 4S*= 1 + D20’ ,03 E’A,0-0D-0 ，， 1D31-+6, ( O?020, 6.0 5,3A-61D E 4S*= 1D 90%*#0#+ 0(,# 1 ,06,1-603 8B 16 ,0’+6120’B ’? ’A81’16B +D3 ’166’0 1 @D?D +8A6 6.0 ,03 E’A,0-0D6 7+60,1+’ 6.+6 +,0 +-1+60 ?16. 4S*= ( =? 1D31213A+’ 4S*= 7A6+61D，W9;; +D3 WII/X WIKQ 3A8’0 7A6+D6 ?0,0 5