裂褶菌F17锰过氧化物酶固态发酵的条件优化及其扩大培养.pdf

中文摘要 中文摘要 白腐真菌分泌的锰过氧化物酶(MnP)是木质素降解酶系统的主要组分，对 木质素解聚，纸浆和染料的脱色均有重要作用。本实验利用本实验室自主分离保 存的白腐菌裂褶菌F17(Schizophyllumsp．F17)进行固态发酵产MnP，研究了裂 褶菌F17固态发酵产MnP的培养条件，在此基础上自行设计了一个通气托盘式反 应器对MnP进行扩大培养，并在自行设计的反应器中进行了初步的发酵动力学研 究，实验结果如下： 1、用响应面方法从稻壳、松木屑、麦麸、稻草、麦秆5种含有木质素的农 业废弃物和黄豆粉中选择出由松木屑、稻草、黄豆粉组成混合固态营养基质，并 得到三者最佳成分比例为：0．52：0．15：0．33，用优化的混合营养基质进行裂褶菌 F17固态发酵产MnP，在发酵第6天时，最大酶活力为11．18U／g。 2、用已得混合营养基质进行MnP合成固态发酵条件的优化，单因子实验表 明，最佳MnP的合成条件是装载量为159，接种量为1mL／g，温度为30℃， 含水率为O．5mL／g，而响应面法得到的组合条件为装载量为10g、接种量为 0．5 mL／g、温度为25℃、含水率为1．0mL／g，实验结果表明接种量、装载量、 温度、含水率对裂褶菌F17MnP的产生有显著影响，且接种量与含水率之间的相 互作用最大，MnP酶活力由优化前的n．18U／g提高到12．83U／g。 3、添加诱导剂进行裂褶菌F17产MnP固态发酵，结果表明，研究的芳香族 化合物、表面活性剂、有机酸等都对MnP酶活力的提高有不同程度的效果，其中 以0．1 13一环糊精和0．5 g／L黎芦醇、0．2g／L吐温80、0．1g／L g／L淀粉的诱导 效果最明显，相对未添加诱导剂时的MnP分别提高了10．38％、10．23％、10．96％ 和10．18％。用响应面法得到一种由吐温80、黎芦醇、淀粉和13一环糊精组成的混 合诱导剂，四者的浓度分别为0．1 1．0 g／L、0．0196g／L、 g／L和O．01g／L， 添加混合诱导剂的酶活力为14．37U／g，比未添加诱导剂时酶活力提高了11．75％。 4、根据裂褶菌F17固态发酵的特点，并结合填充床式反应器和托盘式反应 器的优点设计出通气托盘式固态发酵生物反应器，反应器为5L玻璃制通气反应 器，把500 mL三角瓶的体积放大了10倍，反应器具有通气和散热良好的优点， 能达到对MnP扩大培养的目的。 裂褶菌F17锰过氧化物酶固态发酵的条件优化及其扩大培养 5、在自制通气托盘式反应器中，以松木屑、稻草及黄豆粉为混合营养基质 h 进行固态发酵生产锰过氧化物酶，裂褶菌F17能够产生锰过氧化物酶，发酵96 时，最高酶活力达到13．51U／g，菌体生长与锰过氧化物酶的产生是正相关关系， 二氧化碳释放速率可作为菌体生长预测的指标，建立了锰过氧化物酶固态发酵过 程中菌体生长、酶的产生及二氧化碳释放速率的动力学模型，并得到模型参数， 模型在一定程度上反映了E17锰过氧化物酶固态发酵的产生过程。 关键词：锰过氧化物酶；固态发酵；反应器；动力学；裂褶菌F17 Ⅱ Abstract isthe white—rot main Manganeseperoxidase(MnP)secretedby fungus ofthe all rolein componentlignin—degradingenzymesystem，itplaysimportant