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目 录
中文摘要……………………………………………………………………………………………．I
英文摘要…………………………………………………………………………………………。II
1．前言………………………………………………………………………………………………l
l-1胚胎干细胞概述……………………………………………………………………………．1
1．1．1
ESC的概述……………………………………………………………………………………………………．1
1．1．2各物种ESC建系的进展………………………………………………………………．2
1．2猪胚胎干细胞分离培养研究进展…………………………………………………………．4
1-2．1猪ESC建系的历史与现状……………………………………………………………．4
1．2．2影响猪ESC建系的因素………………………………………………………………．5
1．3猪胚胎干细胞的鉴定………………………………………………………………………。7
1．4本研究的目的意义…………………………………………………………………………．8
2．材料与方法……………………………………………………………………………………。10
2．1实验动物……………………………………………………………………………………10
2．2动物模型……………………………………………………………………………………10
2．2．1自然受孕小鼠…………………………………………………………………………lO
2．2．2猪的人工输精…………………………………………………………………………10
2．3小鼠胚胎干细胞的分离方法………………………………………………………………10
2．3．1饲养层的准备…………………………………………………………………………10
2．3．2体内3．5天囊胚的收集………………………………………………………………．11
2．3．3小鼠孤雌囊胚的收集…………………………………………………………………1l
2．3．4小鼠胚胎干细胞的分离………………………………………………………………11
2．4猪胚胎干细胞的分离………………………………………………………………………12
2．4．1饲养层的准备…………………………………………………………………………．12
2．4．2猪体内受精囊胚的收集………………………………………………………………12
2．4．3猪孤雌囊胚的获得……………………………………………………………………13
2．4．4猪核移植囊胚的获得…………………………………………………………………13
2．4．5猪胚胎干细胞的分离…………………………………………………………………13
2．5胚胎干细胞的鉴定…………………………………………………………………………．14
2．5．1碱性磷酸酶染色………………………………………………………………………14
2．5．2免疫荧光实验…………………………………………………………………………14
2．5．3核型分析………………………………………………………………………………15
2．5．4胚胎干细胞体外分化一--EB的制备和培养………………………………………。16
2．5．5小鼠核移植操作流程…………………………………………………………………16
2．5．6胚胎干细胞常规培养和冻存…………………………………………………………17
2．6胚胎直径的测量……………………………………………………………………………17
2．7统计方法……………………………………………………………………………………17
3．结果……………………………………………………………………………………………………………………………．18
3．1小鼠胚胎干细胞建系结果…………………………………………………………………18
3．1．1饲养层细胞的获得………………………
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