毛细管电泳-光纤光谱联用技术检测结晶紫.pdfVIP

第 34卷 湖北师范学院学报 (自然科学版) Vo1．34 第 2期 JournalofHubeiNormalUniversity(NaturalScience) No．2，20t4 毛细管 电泳一光纤光谱联用技术检测结晶紫 韩 韵，魏国芬，张 霞，连盼盼，王金丽，吕鉴泉 (湖北师范学院 污染物分析与资源化技术湖北省重点实验室，湖北黄石 435002) 摘要：开发新型毛细管电泳一光纤光谱联用技术并应用于结晶紫的快速检测。以结晶紫为对象，考察了电 泳和溶液条件对结晶紫的分离分析信号的影响。结果表明，检测结晶紫的最佳条件为：流动相是0．1moL／ L磷酸缓冲溶液(pH4．0)，检测波长590nm，分离电压3kV，进样时间60S．在最佳条件下，吸光度与0．8 ～ 1O mL结晶紫呈现 良好的线性关系，相关系数为0．9954，检 出限为0．8Ia-g／mL 方法成功地应用于水 体 中结晶紫的快速检测 。 关键词 ：检测；结晶紫；毛细管电泳；光纤光谱 中图分类号：0657．8 文献标识码：A 文章编号 ：1009-2714(2014)02．0088．05 doi：10．3969／j．isan．1009—2714．2014。02．O2O ． 毛细管电泳 (CE)是一种新型高效分离技术，以其柱效高、分析速度快、选择性高、试样消耗少等 优点，现已被广泛用于医药卫生、生化、环境等领域…。近年来，毛细管电泳与多种检测器联用使得 其应用范围更加宽广。Smith等将 cE与改进电喷雾EI连接，实现了cE—Ms联用 -5]，Cheng等将激 光荧光检测器与CE联用 ，电化学检测器的联用使得单个神经细胞 内液样 品分析成为可能 J。 Morris发展了激光拉曼光谱检测法 J，Huang等将 电导检测器与cE联用，用于碱金属离子等样品的 检测 J。Kuhr等利用间接荧光法与cE联用，用于多种天然氨基酸的分离检测 引。 光纤光谱仪是近年发展起来的一种新型光谱仪，其光谱响应范围宽，响应时间短，信噪比高，具有 优秀的光学分辨率，高度集成化、模块化可 自由搭配，实现了一机多模检测 l‘¨，具有广阔的应用前景。 加州大学伯克利分校Benhabib课题组利用多通道毛细管电泳为分离设备与光纤光谱仪的荧光检测 模式联用证实了火星中有机物大分子和生物标记物的存在_】引。亚利桑那大学Hayes等在联用基础 上利用紫外检测器开发出电泳排阻法，成功用于部分碱性染料的分离富集，随后将其应用于带异种电 荷蛋白质的同时分离富集 。该方法主要建立在物理学角度，重现性差，分离能力有限，并不具有 广泛的应用前景。 结晶紫或称龙胆紫，属碱性三苯 甲烷类染料，具有高效的抗菌性，曾被广泛应用于鱼类疾病的抗 菌药。然而近年来，国内外研究者发现结晶紫通过生物体内转化富集，具有 “三致”效应，被列为水产 养殖禁用药物行列 ¨ 。本文将毛细管电泳与光纤光谱仪器连接起来，构建一种新的联用技术，采 用紫外可见检测构建毛细管电泳一光纤光谱仪联用系统，并以结晶紫为模型化合物考察了联用系统 的条件。 1 实验部分 1．1 试剂 收稿 日期 ：2014—_o1—27 作者简介：韩韵 (1988一 )，男，湖北省丹江口市人，硕士生 ，研究方向为基础研究 · 88 · 乙腈 (色谱纯)，结晶紫标准品、磷酸、磷酸二氢钠、乙酸、乙酸铵等分析纯试剂均产于天津科密欧公 司，用水均为双重蒸馏水。结晶紫标准储备液(0．1mg／mL)：准确称取0．0100g结晶紫标准品，用乙 腈溶解并定溶至 100mL 1．2 仪器与实验条件 ’ HR4000光纤光谱仪、DH2000UV—VIS—NIR光源、CUV—CCE毛细管 电泳通道均 由美 国Ocean Optic公司产，GY一6型高压电源(东北大学分析科学研究中心)，石英毛细管柱 19cm×75Ixm(河北 永年光导纤维厂)。 1．3 实验方法 所有溶液使用前均用0．45lxm滤膜过滤，每次实验前分别用0．1mol／LNaOH，0．1mol／LHC1，二 次水，缓冲溶液冲洗毛细管各5min，以0．1mol／L，pH4．0的磷酸缓冲溶液为缓冲介质，采用高度差 进样，进样高度 15cm，进样时间60S，分离电压 3kV，