水体铜胁迫对克氏原螯虾血淋巴ROS和血蓝蛋白含量的影响.pdfVIP

2014年第4期 ScienceandTechnology＆InnovationI科技与创新 水体铜胁迫对克氏原螯虾血淋巴ROS和血蓝蛋白含量的影响 赵 辉 ，魏克强 (山西大学 生命科学学院，山西 太原 030006) 摘 要：在测得 cu2+致克氏原螯虾96hLC50的质量分数为30mg／L的基础上，将螯虾分别暴露于质量分数为0mgm、 0．5mg／L、1．0mgm、3．0mgL／、5．0mgL／、10．0mg／L的Cu 溶液 中，在暴露24h、48h、72h和96h后，测定血淋巴 ROS和血蓝蛋 白含量。结果表明，螯虾血淋巴ROS含量呈现先被诱导上升后被抑制的趋势，cu具有能够抑制螯虾血淋 巴细胞产生活性氧R0s的能力；血清血蓝蛋白含量先上升而后逐渐趋于稳定，最后显著上升。 关键词：铜离子 (Cu2)；克氏原螯虾；ROS；血蓝蛋白 中图分类号：X174 文献标识码：A 文章编号：2095--6835(2014)04--0103--02 甲壳动物的免疫防御为非特异性免疫，缺乏高等动植物的 别为0．5mg／L、1．0mg／L、3．0mgL／、5．0mgL／、10．0mg／L)和 特异性免疫功能，利用活性氧作为杀伤分子的氧化性杀菌机制 一 个对照组 (质量浓度为0mgm)，处理时间为96h。采用体 是甲壳动物一种主要的防御机制，它主要指吞噬细胞在吞噬异 外暴露的方法对克氏原螯虾进行cu染毒，每个处理组 15只。 物或者受刺激活化呼吸爆发产生大量的活性氧自由基 (reactive 整个试验阶段停止喂食，水温 14—16℃。 oxygenspecies，ROS)，这个过程就是呼吸爆发。研究表明，机 1．3 采样及样品处理 体活性氧产生的强弱程度直接反映了血细胞杀菌功能的强弱。 暴露 24h、48h、72h、96h后分别从对照组和处理组中随 血蓝蛋白是生物体内的一种多功能蛋白，甲壳动物血蓝蛋 白约 机取出3尾螯虾，采集血淋巴，用 1mL注射器从螯虾围心腔采 占血淋巴蛋白的90％以上。作为一种呼吸蛋白，血蓝蛋白除载 血 ，制成抗凝血 (抗凝剂 ：血=1：1)，其中一部分用于血淋巴 氧外还具有酚氧化物酶活性、抗菌肽活性和凝集活性等功能， ROS含量的测定，另一部分抗凝血制备成血清，在温度为4℃ 此外血蓝蛋白还具有转运金属离子、能量储存等功能。 的条件下，5000r／min离心 10min，取出的上清液于--20oC的 本实验以克氏原螯虾为研究对象，测定了cu2中胁迫下螫虾 条件下保存，用于血蓝蛋白的测定。 血细胞呼吸爆发后血淋巴ROS含量和血淋巴血蓝蛋白含量的 1．4 血淋 巴ROS含量测定 变化，探讨 cu2十对克氏原螫虾血淋巴ROS和血蓝蛋白含量的影 血淋巴ROS的测定按照细胞活性氧 (ROS)试剂盒说明书 响，从而为水产品的安全养殖提供科学依据。 进行 ，组织ROS利用DCFH．DA荧光探针进行检测 ，取抗凝血 1 材料与方法 190 和 1O 物质的量浓度为0．1mmol／L的DCFH．DA溶液 1．1 实验材料 加入96孔黑色酶标板中，混匀，置于酶标仪中37℃保温。30min 克氏原螯虾 (Procambarusclarkii)，购于太原市五龙口水产 后于激发波长485nln，在发射波长538nln的条件下检测荧光 批发市场 ，体重 (20．1±0．5)g，体长 (8．7±0．3)cm。实验前 强度 ，结果以突光强度／毫克蛋白表示。 在40cmx30cm×20cm 的玻璃水族箱中驯养 1周 ，驯养水为 1．5 血清血蓝蛋白含量测定 曝气 2d以上的自来水 ，每天不问断曝气，