甘草酸抗病毒性心肌炎动物实验研究.pdf

浙江大学医学院顺士论文 |_草睦抗痫毒惟一Cdl／L炎动物实验埘究 甘草酸抗病毒性心肌炎动物实验研究 浙住太学医学院 痴原生助学 99_j置研先生 伤 劲 导 师 屡 挺 中文摘要 | f WHO的全球流行病学调查表明肠道病毒属的柯萨奇病毒／3(CVB) k 是引起人类心血管病变的第一位的病毒：自50年代起陆续的研究资料也 证实在病因学上CVB3与病毒性心肌炎、扩张型心肌病显著相关。现有的 对CVB 3致病机制的认识主要反映于病毒急性感染时的直接细胞毒杀伤效 应，及亚急性、慢性期(包括潜伏状态)由其介导的持续的免疫病理反应； 但对于完整的致病机制的理解还有很长的路要走。根据已知理论提出的多 种治疗手段，如传统的核苷类似物化学修饰、细胞因子、免疫抑制剂、反 义核酸等治疗还不尽如人意，目前临床上仍缺乏有效的抗CVB，药物。甘 草作为众药之王．味甘，性平，作用趋向即归经于心、肺、脾、胃，具清 热解毒、补中益气功效。现代研究表明其主要活性成分甘草酸具有广谱抗 病毒，尤其是对免疫的双向调节功效。我们基于甘草酸的传统理论及生物 功能的研究进展．试行甘草酸体内抗CVB，急性病毒性心肌炎的可行性研 浙江大学医学院硕士论文 甘草酸抗病毒性心肌炎动物实验研究 究。y 210…) 50／0．1m1 本实验利用塑堕童堕量呈!型!竖z堡(滴定log·。TCID 建立小鼠病毒性心肌炎模型，所用小鼠为心肌炎易感鼠系BALB／c雄鼠， 共269只，10．1 7-4-1．0790l实验按以下流程设计： 1． 测定病毒株BALB／c鼠体内LD50，构建CVB3体内急性感染实验模型： 2． 测定甘草酸BALB／e鼠体内LDⅢ 3． 正交设计以中位生存时间(MSD)为指标，选抒甘草酸剂越、作tL}j时 机、疗程； 4． 甘草酸治疗剂量体内抗病毒，设立阳性对照病毒唑组，空白对照组： 5． 甘草酸根据病毒感染时机分为感染前、感染时、感染后治疗，井分析 比较； 6． 甘草酸最大实验剂量100ug／g治疗长期观测毒副作用： 实验小鼠计算MSD、生存率；体外单层细胞培养细胞病变效应(CPE) 法滴定TCID川常规苏木精一伊红染色(HE)法病理观察；生化酶谱比 色法检测LDH：心肌组织RNA常规抽提，经扩增后琼脂糖电泳检测病毒 核酸。整合分析甘草酸体内抗病毒疗效的各指标权重，确定综合抗病毒指 数．建立量效反应方程。结果： 1． TCID CVB，LD o 5o／0．1ml；致死剂量病毒攻击实验鼠后， 50=10～logl 心肌病理见典型的心肌炎表现：炎症、变性坏死、单核淋巴细胞浸润， 中位生存时间(MSD)=4．1l天，log=0 达高峰，分别10．01 第l2～14天达4．85±0．35与116．75±18．85u／dI；心肌组织病毒滴度显 著高于脾、’肾、胰．而脾、肾、胰之间无差异；心肌RNA持续阳性； 2． 甘草酸LDso=1 4．69mg／109；正交设计选取因子水平：甘草酸剂量 100ug／g；治疗7天；感染后l天即治疗最延长MSD，而病毒种量 1 0LDj oMSD最低；方差分析甘草酸剂量50ug／g与100ug／g无著异： 2 浙江太学医学院硕士论文 H。草酸抗病毒性心肌炎动物实验研究 3 甘草酸50ug／g与100ug／g剂量治疗组与病毒唑治疗组的各指标