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ISSN 中国生物化学与分子生物学报 2005 年 4 月
( )
CN 113870Q Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology 21 2 :227～233
人甲状旁腺素( 134) 衍生物在大肠杆菌中
表达、纯化及其生物学活性
狄 旭 , 刘长征 , 陈松森 , 张艳丽 , 邓艳春 , 孙 兰 , 杨 京
( 医学分子生物学国家重点实验室 , 中国医学科学院基础医学研究所、
中国协和医科大学基础医学院, 北京 100005)
摘要 为研究 GlyhPTH ( 134) 衍生物的生物学活性 ,用重叠 PCR 方法合成编码 hPTH ( 134) 的DNA
片段 ,克隆到融合表达载体p GEX2T 的缩短型谷胱甘肽转移酶基因 GST69 △的 3′末端,构建正确读
码框架的融合基因. 在两个基因间引入蛋白质羟胺切割位点序列 ,转入 E . coli JM109 中 ,IPTG 诱导
表达. 该融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的 20 %以上,主要以包涵体形式存在 ,盐酸羟胺切割表达
产物. 分析表明 ,80 %左右的融合蛋白被裂解为 GST69 △和 GlyhPTH ( 134) . 经分子筛柱层析和反相
层析分离纯化获得重组 GlyhPTH ( 134) 衍生物 ,纯度达 98 % 以上, 回收率约为 10 mg/ 升发酵液 ,分
( ) ( )
子量为 4 177 ,等电点 pI 为 840 ,N 端 16 个氨基酸 ,除第一个为甘氨酸外 ,其余与天然 hPTH 134
序列一致. Western 印迹结果表明 ,GlyhPTH ( 134) 衍生物具有 hPTH ( 134) 的免疫学活性. 体外活性
测定结果表明 ,GlyhPTH ( 134) 衍生物能刺激人成骨细胞 HOSTE85 增殖、增加细胞内胶原合成、ALP
活性增高和 cAMP 生成量增加 ,并呈量效关系 ,提示它具有与化学合成的 hPTH ( 134) 相同的生物学
活性 ,N 端多一个 Gly 对其活性无明显影响.
关键词 GlyhPTH ( 134) 衍生物 ,融合表达 ,羟胺切割 ,纯化 ,生物学活性
中图分类号 Q57 ,Q78
Expression , Purification and Biological Activity of a Recombinant
Human Parathyroid Hormone( 134) Analogue in E . coli
DI Xu , LIU ChangZheng , CHEN SongSen , ZHANG YanLi , DENG YanChun , SUN Lan , YANGJing
( National Laboratory of Molecular Biology , Institute of Basic Medical Sciences , Chines
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