7毒前S2蛋白下调胰岛素受体启动子的研究.pdfVIP

生堡医堂苤壶兰Q塑生!!旦丝旦笠塑鲞箜塑期．盟趔丛鲤』鱼i磐：盟!堡畦壁丝：!Q塑：!些塑：盟!：箜 ．基础研究． 乙型肝炎病毒前S2蛋白下调胰岛素 受体启动子的研究 纪冬韩萍张健邵清刘妍王琳陈国凤 【摘要】 目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)前S2蛋白对胰岛素受体(INSR)启动子转录的下调 作用。方法HBV前s2蛋白真核表达质粒pcDNA3．1(一)-preS2及INSR启动子真核报告质粒 pCAT3．INSRp使用常规分子生物学方法进行构建，并经酶切、测序证实。接下来，将构建好的 pcDNA3．1(一)-preS2质粒以1．0、1．5、2．0雌转染HepG2细胞，提取总RNA后进行相对实时荧光定 p．g递增量 量PCR检测以明确前s2蛋白mRNA的表达量。然后，分别将pCAT3-INSRp质粒以0．2 (0～2．0lag)转染HepG2、Huh7细胞系，CAT．ELISA法检测转染细胞的氯霉素乙酰转移酶(CAT)表达 量以制作pCAT3-INSRp的量-效曲线。最后，根据量一效曲线选择合适的pCAT3一INSRp转染剂量(1．0 使用抗前S2蛋白单克隆抗体以阻断前S2蛋白的作用，使用CAT—ELISA方法检测转染细胞的CAT表 达量，以观察前S2蛋白对于I-NSR启动子的调节作用。结果转染了pcDNA3．I(一)一preS2的细胞 可以正确表达HBV前s2蛋白的mRNA。peAT3一INSRp质粒转染细胞后CAT的表达随着转染剂量的 增加而增加，量一效曲线为s形。转染不同剂量pcDNA3．1(一)-preS2后，HepG2细胞内CAT基因的表 达水平分别为对照的69．8％、60．1％、19．7％、10．3％、5．6％(转染后36h)和68．6％、56．0％、 10．3％、8．6％、3．2％(转染后72h)。同时，在转染2．0峭pcDNA3．1(一)-preS2的细胞培养上清中 加入前s2单抗后，其CAT的表达量恢复为对照的55．4％(36h)和69．7％(72h)。Huh7细胞的结果 同HepG：细胞结果相似。结论克隆的INSR启动子有顺式激活下游基因的活性；HBV的前S2蛋白 对INSR启动子转录具有下调作用，可以在分子水平解释肝源性糖尿病发病机制的一部分。 【关键词】肝炎，乙型；肝炎病毒，乙型；受体，胰岛素；启动区(遗传学) effectof Bvirus insulin Down-regulatinghepatitis upon gene J／ pre-S2protein receptorpromoter Jian，SHAOQing，UUYah，WANGLin，CHEN‰垂略Military Do昭，HANP垤，ZHANG Medwal 7th 302 PostgraduateSchool，theDepartmentofInfectiousDiseases，BeqingHospitalofPIA，Be咖ng 100853，China com．clt Correspondingauthor：CHENCuo垂ng，Email：bjc臃02@yahoa of insulin To the effectHBV 【Abstract】ObjeL嘣veinvestigate pre-S2proteinupon down—regulating and receptor(INSR)genepromoter．MethodsEukaryotieexpressionpla．smidpcDNA3．1(一)·preS