含小鼠糖皮质激素受体第二外显子基因片段的克隆和结构分析.pdfVIP

癌变 ·畸变 ·突变 　　1999 年第 11 卷第 4 期 　　　　　　　　　　　　　　　Carcinogenesis Teratogenesis and Mutagenesis Vol 11 No 4 1999 含小鼠糖皮质激素受体第二外显子基因片段的克隆和结构分析① 李 　坚 　胡以平 　傅继梁 第二军医大学基础部生物教研室 、医学分子遗传学开放实验室 　上海 　200433 ( ) 克隆适于构建可调控基因打靶载体的小鼠糖皮质激素受体 GR 基因片段 ,为建立糖皮质激素受体基因缺陷型小鼠模 摘要 　 型奠定基础 。用 PCR 扩增小鼠 GR 基因第二外显子上 562bp 的核酸片段作为探针 ,筛选小鼠基因组文库 ,共获得 6 个阳性克 隆 。对 C10 克隆进行详细的测序和酶切图谱和 Sout hern 杂交分析后获得一 6 . 5kb 的基因片段 。该片段含完整的 GR 基因第 二外显子 ,左右分别有 39kb 和 14kb 的DNA 片段可作为下一步构建基因打靶载体的同源臂 。 基因打靶 ;糖皮质激素受体基因 关键词 　 CLONING A ND STRUCTURE A NALYSIS OF GENE FRA GMENT BEA RING MOUSE GL UCOCORTICOID RECEPTOR GENE EXON Ⅱ Li J ian , Hu Yiping , Fu J iliang Dep art m en t of B iology an d Op en L ab of M edical M olecul ar Genet ics , S econ d M il it ary M edical Univers ity , S hang hai 　200433 Abstract 　To clone a genomic DNA fragment cont aining mouse glucocorticoid receptor ( GR) gene for t he con st ruction of an inducible gene t argeting vector used in t he est ablishment of a GR gene dificient mouse model . The mouse genomic library was screened by using a 562bp PCR p roduct from GR gene exon Ⅱas a p robe . Six po si tive clones were got after screening . The DNA of po sitive clones was p rofoundly characterized by sequencing , re st riction mapping and Sout hern blotting to get t he right fragment . A 6 . 5 kb DNA fragment was sep arated from t he C10 clone . The gene fragment cont ains entire GR gene exon Ⅱ, and two flanking fragment s which are 3 . 9 kb and 1. 4 kb respectively can be used as homologous arm in t he const ruction of t he t argeting vector . Key words 　gene t argeting ; glucocorticoid receptor gene 　　徐仁宝教授所领导的课题组经多年的研究提出 GR 基因缺陷在纯合状态下的致死效应和在杂合状 ( ) 态时生存能力下降的问题(3) 。利用 knockout 技术建 全身炎症反应综合征 SIR S 发生的糖皮质激