实时定量RT_PCR方法检测太平洋牡蛎中的诺沃克样病毒_岳志芹.pdfVIP

实时定量 RTPCR 方法检测太平洋牡蛎中的诺沃克样病毒 1 2 1 1 1 1 1 2 岳志芹 ,汪 　俊 ,梁成珠 ,雷质文 ,高宏伟 ,徐 　彪 ,朱来华 ,薛长湖 ( 1. 山东出入境检验检疫局技术中心 , 山东 青岛 266002 ; 2 . 中国海洋大学 食品安全实验室 , 山东 青岛 266003) ( ) 摘要 : 建立了 Taqman 实时定量 R TPCR 方法检测诺沃克样病毒 Norwalklike Viru s ,NL V 的方法 ,并对中 国的牡蛎样品进行了分析 。选取 G Ⅱ型 NL V 的 RN A 聚合酶区域 ,利用 Primer Exp ress 2 . 0 软件设计引物 和探针 ,建立了定量 R TPCR 反应体系 。将含有 NL V 扩增片段的质粒 10 倍梯度稀释 ,作为标准品进行反应 以确定检测灵敏度并制备标准曲线 。结果表明 ,质粒密度在 6 ×106 ,6 ×105 ,6 ×104 ,6 ×103 ,6 ×102 ,6 ×101 , 6 个拷贝之间 ,共 7 个数量级的范围内,定量 R TPCR 反应都有“S”型扩增曲线 ,检测灵敏度为 6 个拷贝。制 ( ) 2 备的标准曲线中 ,病毒拷贝数 X 与 C 值的关系为 C = - 3 . 36lg X + 37 . 11 ,相关系数 R = 0 . 998 。对中国 t t ( ) 37 批太平洋牡蛎 Crassos t rea g i g as Thunber g 样品进行了定量检测 ,有 6 批样品为阳性 ,并根据标准曲线测 定了NL V 的含量 。 ( ) 关键词 : 牡蛎 ;诺沃克样病毒 Norwalklike viru s ,NL V ;实时定量 R TPCR ; Taqman 探针 中图分类号 :Q9333 1 　　　　　　　文献标识码 : A 　　　　　文章编号 : (2008) 08000 104 ( ) 　　诺沃克样病毒 Norwalklike vir u s ,NL V 是非 方法检测 中国的牡蛎样 品 , 序列分析表 明中国的 细菌性急性肠 胃炎的主要病原体之一 ,可引起患者 NL V 为 G Ⅱ型 。采用 R TPCR 技术检测 NL V , 需 恶心、呕吐、腹痛 、腹泻 ,甚至低热 、头痛 、肌痛 、乏力 要经过琼脂糖凝胶电泳 、EB 染色观察结果 ,对人体 及食欲减退等症状[ 1～3 ] 。该病毒于 1968 年在美国俄 和环境有害 , 并且只能进行定性检测 , 不能定量分 亥俄州诺沃克镇首