通过N端引入芳香族氨基酸提高木聚糖酶的热稳定性.pdfVIP

日 ISSN1000．3061CNll_1998Q／ChinJBi。techAugust25，2014Vo1．30No．8 Improvingthermalstabilityofxylanasebyintroducing aromaticresiduesattheN．．terminus W enqinBai ，LuhongYang，andYanheM a2，。 1SchoolofLlyeScience，ShanxiNormalUniversity，Linfen041004，Shanxi，China 2NationalEngineeringLaboratoryfo，IndustrialEnzymes，TianjinInstituteofIndustrialBiotechnology，ChineseAcademyofSciences， Tianjin300308，China 3NationalEngineeringLaboratoryfo，IndustrialEnzymes，InstituteofMicrobiology，ChineseAcademyofSciences，Beijing100101， China Abstract： Thermophilicandalkalophilicxylanaseshavegreatpotentialinthepulpbleachingindustry．Inordertoimprovehte thermalstabilityofanalkalinefamily 11xylanaseXynl1A—LC．aromaticresidueswereintroducedintohteN-terminusofthe enzymebyrationaldesign．Themutantincreasedhteoptimum temperaturebv5℃．Thewildtypehadahalf-timeof22minat 65℃ andpH 8．0 (Tris．HC1buffer)．Underthesamecondition．themutanthadhtehalf-timeof106min．CD spectroscopy revealedthatthemeltingtemperature( )valuesofthewildtypeandmutantwere55．3℃ and67．9℃，respectively．These resultsshowedthathteinrtoductionofaromaticresiduescouldenhnacethethermalstabiliytofXynl1A．LC． Keywords： xylanase，themr alstabiliyt,aromaticresidues，hydrophobicinteraction 木聚糖酶 (EC3．2．1．8)是降解植物细胞壁 N．末端额外的D一链 、热稳定区的存在 、高比 中半纤维素木聚糖的关键酶。由于具有应用于 例的Ser／Thr及高含量的8一折叠2【】、在N一末端或 造纸、饲料生产、食品加工、麻类脱胶 以及生 C．末端或 ．螺旋位置~IA．-硫键[10-12l。这些修饰 物燃料开发等工业领域的潜力，木聚糖酶越来 可以加强分子内和／或分子间的相互作用，从而导 越引起人们的广泛关注 1。在许多工业应用过程 致酶分子更加稳定。这些信息为提高木聚糖酶的 中，由于降温过程耗费能量且工艺繁琐 ，或者 分子改造提供了一定的理论指导。 高温可以提高底物的溶解度、降低污染率等原 1l家族木聚糖酶N．末端的稳定对酶整体结 因，嗜热的或耐热的木聚糖酶显示出很强的优 构的稳定起重要作用。研究表明，用来源于褐