36二羟黄酮对重组人蛋白激酶C2全酶的抑制作用及其动力学分析,一K.pdfVIP

维普资讯 3，6一二羟黄酮对重组人蛋白激酶 CK2全酶的抑制作用及其动力学分析 李春梅 一，刘新光 ，林小聪 ，陈小文 一，梁念慈 (1．广东医学院生物化学与分子生物学研究所，广东湛江524023；2J东药 学院生化教研室，广东广州510224；3深圳市儿童医院儿科研究所，广东深圳 518026) 摘要 ：目的 观察3，6-二羟黄酮对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机制，寻找CK2的抑制剂 方法 以重 组人 CK2全酶为分子靶点，检测不同浓度 3，6一二羟黄酮对CK2活性的影响，并通过酶的动力学分析其抑制作用机制。CK2活 性通过测定转移到CK2底物上的[一!P]A_rP的[弛P]放射活度来检测。结果 重组人 CK2与天然CK2的性质完全一致、、3，6一 二羟黄酮对重组人CK2全酶具有较强的抑制作用，[C5o为 l3．93wnol·L一。；进一步分析，它与A1]P呈竞争性抑制CK2的活性， 抑制常数 ．值为 l0．67fand·L一。；与酪蛋白呈以非竞争性为主的混合性抑制CK2的活性，抑制常数 ．值为 17．34wnol’L 结论 3，6．二羟黄酮是一种重组人蛋白激酶CK2的抑制剂。重组人 CK2可作为一种较为简便地筛选和开发有效的CK2抑制 剂的分子靶点。 关键词：蛋白激酶 CK2；重组蛋白；全酶；黄酮；3，6一二羟黄酮；酶动力学 中图分类号：Q555．7；Q784；Q814．1；R963 文献标识码：A 文章编号：1001—2494(2004)12—0903—04 Inhibitoryeffectand itskineticanalysisof3．6-dihydroxyflavoneonrecombinanthuman protein kinaseCK2 holoenzyme LIChun—mei一，LIU Xin—guang卜， LINXiao-cong，CHENXiao-wen～，L1ANGNian—ci(1．InstituteofBiochemisto＆MolecalarBiolo~， GuangdongMedicalCollege，Zhanjiang524023，China；2．DepartmentofBiochemistry，GuangdongPharmaceutical Colelge，Guangzhou 510224，China ；3，PediatricsInstituteofShenzhenChildrensHospital，Shenzhen518026，China) ABSTRACT：OBJECTIVE TofindtheinhibitorofproteinkinaseCK2byinvestigatingthedireeteffectof3，6一dihvdrox avoneonholoen— zy／neanditskinetics．METHODS Theeffectsofaseriesofconcentrationsof3，6-dihydroxyflavonesonrecombinnathumanproteinkinase CK2holoenzymewereinvestigated．Themechanismofinhibitionwasnaalyzde byitskinetics．Th eCK2activitywasassayedbydetectingincor— porationof32pof[—3P]ATPintohtesubstrateundervariousconditions．RESULTS Thecharaeteristicnadfuncti)(n()fthereconstituted holoenzymewereconsistentwiht thoseofnativeCK2．3，6-dihydroxyflavonestronglyihnibitde hteholoenzymeactivityofrecombinnathmu an proteinkinaseCK2(IC5o=13．93tmaol。L )．Kineticstudiesshowde htat3，6-dihydroxyflavoneihnibitide CK2competitivelywithATP(K． 10．67tmaol。L )nadnoneompetitivelydominantlywihtcasein(K，17．34prnol。L