毛细管电泳的原理及应用第一讲毛细管电泳简介.pdfVIP

讲 座 毛细管电泳的原理及应用* 第一讲 毛细管电泳简介 罗国安 王义明 清（华大学生命科学与工程研究院 清华大学化学系 北京 100084） 10-13 10-15mol，激光诱导荧光检测器则达 10-19～ 1 概述 10-21mol；高分辨率，其每米理论塔板数为几十万， 毛细管电泳 c（apillaryelectrophoresis,CE）又 高者可达几百万乃至千万，而HPLC一般为几千到 叫高效毛细管电泳 H（PCE ，是近年来发展最快的 几万；高速度，最快可在60s内完成，有250s内分离 分析方法之一。1981年Jorgenson和Lukacs[1首先 10种蛋白质、1.7min分离19种阳离子及3min内分 提出在75m内径毛细管柱内用高电压进行分离， 离30种阴离子的报道；样品少，只需nL10-9L）级 创立了现代毛细管电泳。1984年Terabe等[2]建立了 的进样量；成本低，只需少量 几（毫升）流动相和价格 胶束毛细管电动力学色谱。?987年Hjerten建立了 低廉的毛细管。由于以上优点以及分离生物大分子 毛细管等电聚焦，Cohen和Karger[4]提出了毛细管 的能力，使CE成为近年来发展最迅速的分离分析 凝胶电泳。1988 1989年出现了第一批毛细管电泳 方法之一。当然CE还是一种正在发展中的技术，有 商品仪器。短短几年内，由于CE符合了以生物工程 些理论研究和实际应用正在进行与开发。 为代表的生命科学各领域中对多肽、蛋白质 包（括 2 CE的基本原理 酶、抗体）、核苷酸乃至脱氧核糖核酸 D（NA）的分离 分析要求，得到了迅速的发展。CE是经典电泳技术 CE统指以高压电场为驱动力，以毛细管为分离 和现代微柱分离相结合的产物。CE和高效液相色谱 通道，依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的 法 H（PLC）相比，其相同处在于都是高效分离技术， 差异而实现分离的一类液相分离技术。其仪器装置 仪器操作均可 自动化，且二者均有多种不同分离模 简图见图1，其结构包括一个高压电源，一根毛细 式。二者之间差异在于：CE用迁移时间取代HPLC 管，一个检测器及两个供毛细管两端插入而又可和 中的保留时间，CE的分析时间通常不超过30min, 电源相连的缓冲液贮瓶。在电解质溶液中，带电粒子 比HPLC速度快；对CE而言，从理论上推得其理论 在电场作用下，以不同的速度向其所带电荷相反方 塔板高度和溶质的扩散系数成正比，对扩散系数小 向迁移的现象叫电泳。CE所用的石英毛细管柱，在 的生物大分子而言，其柱效就要比HPLC高得多； pH 3情况下，其内表面带负电，和溶液接触时形成 CE所需样品为nL级，最低可达270fL流动相用量 了一双电层。在高电压作用下，双电层中的水合阳离 也只需几毫升，而HPLC所需样品为 L级，流动相 子引起流体整体地朝负极方向移动的现象叫电渗。 则需几百毫升乃至更多；但CE仅能实现微量制备， 粒子在毛细管内电解质中的迁移速度等于电泳和电 而HPLC可作常量制备。CE和普通电泳相比，由于 渗流 E（OF）两种速度的矢量和。正离子的运动方向 其采用高电场，因此分离速度要快得多；检测器则除 和电渗流一致，故最先流出；中性粒子的电泳流速度 了未能和原子吸收及红外光谱连接以外，其它类型 为 “零”，故其迁移速度相当于电渗流速度；负离子的 检测器均已和CE实现了连接检测；一般电泳定量 运动方向和电渗流方向相反，但因电渗流速度一般 精度差，而CE和HPLC相近；CE操作 自动化程度 都大于电泳流速度，故它将在中性粒子之后流出，从 比普通 电泳要高得多。总之，