RNA干扰技术抑制HGF表达对人结肠癌细胞SW620增殖和移行行为影响.pdfVIP

中文摘要 RNA干扰技术抑制HGF表达对人结肠癌细胞 SW620的增殖和移行行为的影响 摘 要 结直肠癌是最常见的恶性肿瘤之一，占消化道恶性肿瘤 的第二位，严重威胁到人类的健康。目前，临床上常用的结 直肠癌的治疗方法如手术、放疗和化疗等虽然具有一定的疗 效，但是创伤大，副反应重，预后差。因此，寻求一种新的、 ’副反应小、治疗效果更好的方法势在必行。现已证实，结直 肠癌的发展是一个多步骤、多阶段及多因素参与的疾病，而 癌基因的变异及其参与的信号转导与肿瘤发展的关系极为 密切。在众多信号传导网络中，蛋白酪氨酸激酶受体通路是 最重要的传导通路之一。这也正是肝细胞生长因子 Grouth (Hepatocyte 导通路的首要环节。 肝细胞生长因子HGF又称分散因子(scatter factor，SF) 是一种多肽生长因子，具有强促有丝分裂、组织器官成形、 诱导上皮细胞迁移、侵袭以及诱导血管生成等作用。近年研 究表明，在某些病理过程中，特别是在一些恶性肿瘤组织中 包括结直肠癌在内，HGF／c．Met存在突变、过表达，而且与 肿瘤发生、发展、转移及患者预后有密切关系。有研究表明， 结直肠癌患者血清中HGF含量显著升高，其中合并肝转移 的结直肠癌患者的血清中HGF含量较无肝转移的患者更高， 推测HGF对结直肠癌的诊断、分期和预后的判断可能具有 一定的价值，特别是对于结直肠癌患者有无肝转移将是一个 中文摘要 很有价值的判断指标。因此，HGF极有可能成为新的结直 肠癌治疗靶点。 RNA干扰(RNA 地降解该mRNA，从而产生相应的功能表型缺失，属于转录 silence，PTGS)。 后水平的基因沉默(post．transcriptionalgene 目前，I矾Ai技术已经迅速而广泛的应用到基因功能鉴定、 基因表达、转录后调控等热门研究领域，并为多种疾病的基 因治疗提供了新的思路，尤其在肿瘤的基因治疗方面显示出 诱人的前景。其中小分子干扰双链RNA(small interfering RNA， 效果，为肿瘤的基因治疗开辟了新的途径。 我们前期实验已证明HGF可以促进人结肠癌细胞 SW620的增殖和移行，并呈质量浓度依赖性。本实验采用 癌细胞株SW620的增殖和移行的影响，以期寻找治疗结直 肠癌的新方法。 目的：探讨采用RNA干扰方法抑制HGF基因表达对结 肠癌细胞SW620增殖、侵袭的影响。 方法： 2000介导，将 1本实验用脂质体LIPOFECTAMINETM a／13 siRNA转染入人 Santa公司设计并合成的特异性的HGF 结肠癌细胞株SW620，同时设立阴性对照和空白对照。在倒 置荧光显微镜下测定细胞的瞬时转染效率。 2用Western 中文摘要 mRNA和蛋白表达改变情况。 3倒置显微镜下观察各组细胞的形态学变化。 4 MTT检测细胞增殖活性的变化情况，并绘出各组细 胞的生长曲线。 5流式细胞仪检测各组细胞的细胞周期变化。 6基底膜重建实验比较各组细胞的移行能力。 7扫描及透射电镜检测各组细胞的超微结构变化。 结果： 1倒置荧光显微镜下可观察到细胞瞬时转染效率约为 70．80％。 2Western Q／13 照组