间隙连接蛋白的结构和功能及其肿瘤组织中的表达赵威北京肿….pdfVIP

《分子生物物理学》研究生评述2003 间隙连接蛋白的结构和功能及其肿瘤组织中的表达 赵威 北京肿瘤医院 学号 w22009 1.引言 细胞间的通讯方式可分为间接与直接方式。以体循环远程分泌、旁分泌或自 分泌方式经第二信使途径完成一系列生理、生化功能的调节方式称为间接通讯； 而以细胞间的间隙连接,为途径进行的细胞间直接的信息交流，称为直接通讯， 又称间隙连接细胞间通讯。 2.间隙连接的组成、分布与结构 间隙连接由相邻细胞膜上的两个连接子相互锚定组成，而连接子是一个六聚 体，细胞间隙连接是由距离 15～20A 的2 个相邻细胞膜上的 2 个连接子组装而 成的膜通道，其生化成分主要是分子量为 28kD 的膜蛋白。每个连接子由 6 个哑 铃形的蛋白质亚单位组成，中心是直径约为 15A 的亲水通道，连接子两端分别 嵌入两个相邻的细胞，形成一个亲水性孔道[图一]。这种孔道允许两个细胞间自 由交换分子量为 1500 道尔顿以下的水溶性分子。这种直接交换的意义在于，相 邻的细胞可以共享小分子物质，因此可以快速和可逆地促进相邻细胞对外界信号 的协同反应。由于它允许分子量为 1000～1600D 以下的离子或小分子通过，如 Ca2+、1，4 ，5-三磷酸肌醇、NO 、cAMP 等第二信使及生长调节物质，从而保 证细胞间正常生长控制信号的传递。连接蛋白是由十余个成员组成的一个保守大 4 4 家族，分子量由 26～56KD （≈2.6×10～5.6×10 u）不等,可分为α-Cx 和β-Cx. 在啮齿类动物中,至少由 13 个基因编码，与其它种属有较高的同源性，各亚成员 之间有 50%～60%同源，主要的差别在于 Cx 分子的胞浆部分。 图一：间隙连接蛋白 六聚体形成的两个 连接子 连接蛋白的共同结构如图所示[图二][1] 。四个跨膜亲水片段称为 M1-4 ，为 α 螺旋结构，两个胞外环分别称为 E1-2 ，和一个胞浆环。连接蛋白的羧基末端与 氨基末端位于胞浆内，氨基末端相对比较保守，而羧基末端则差别较大。羧基末 《分子生物物理学》研究生评述2003 端的丝/苏及酪氨酸残基的磷酸化/去磷酸化水平影响着缝隙连接的形成及功能状 态，并能够感受胞内的信息而改变构象，从而调节缝隙连接的形成及传导性。胞 外的 E1 与 E2 区各含三个半胱氨酸残基，E1 区的三个半胱氨酸分别由 1 个和 3 个氨基酸残基分隔，E2 区的半胱氨酸分别由 4 个与 5 个氨基酸残基分隔，但在 Cx31 中，后者分别由 5 个与 5 个氨基酸残基分隔，在 E1 环与 E2 环之间至少有 ［ ］ 一个二硫键连接 2 。利用位点突变技术表明，在Xenopus 卵母细胞中，Cx32 的 E1 、E2 区的任一半胱氨酸残基突变都导致缝隙连接的传导性的完全阻断，E1 、 E2 区的半胱氨酸残基单个突变导致缝隙连接功能丧失，而成对的突变或第三位 ［ ］ 半胱氨酸残基的单个突变则不影响功能 3 。而 E1 与 E2 的第一与第三位半胱氨 酸互换，则传导性最高。E 区形成堆栈的 β-Sheet 构象，E1 、E2 的反平行的 β-Sheet 结构与 4 个跨膜的 α螺旋的顺序排列相关。 图二：间隙连接蛋白的四个跨膜亲水片段及跨膜结构 连接蛋白可寡聚成六聚体即连接子或称半通道。连接子可由单一连接蛋白组 成称同聚体连接子，也可有几种连接蛋白构成异聚体连接子，如在羊晶状体上皮 间存在 Cx46 与 Cx50 的异聚体连接子。不同组合的异聚体连接子对物质的通透 性具有选择性，而 E2 区域的相互作用与选择性通透有关。 由异聚体连接子参与组成的间隙连接称作异型间隙连接，反之称作同型间隙 连接，在间隙连接间的细胞间隙有 35 埃。 用矩形框代表跨膜 6 个 α 螺旋[图三][4]，两个重叠对称的轴位于细胞外区的 连接。在细胞连接通道处，连接子并列重叠一致（