猪Ⅱ型圆环病毒ORF2与猪GM-CSF基因重组腺病毒共表达及免疫效果分析.pdfVIP

生物技术通报 · 研 究 报 告 · Bl0TECHNOL0GY BULLETIN 2009年 第 12期 猪 Ⅱ型圆环病毒 ORF2与猪 GM-CSF基因 重组腺病毒共表达及免疫效果分析 陈降华 刘忠华 李文平 (湖南农业大学动物医学院 ，长沙 410128) 摘 要： 旨在构建合融合基 因pGMCSF．ORF2的重组腺病毒，并对其表达水平和免疫效果进行分析 。运用 PCR方法扩 增 PCV2ORF2和 pGM．CSF基 因，拼接后克隆入pMD18-T载体 ，然后再亚克隆入腺病毒穿梭质粒 pShuttle—CMV 中，阳性穿梭质 粒经 PmeI酶线性化后电转化含腺病毒基因组 (AdEasy一1)的大肠杆菌细胞 BJ5183一Ad一1，成功获得 了重组腺病毒 DNA。将纯 化后的重组腺病毒 DNA转染AD293细胞 ，经过病毒基 因组的PCR和转录水平的RT—PCR及 Westernblot等方面对融合蛋 白 的表达进行 了鉴定。以该病毒免疫 Bab1／c小白鼠，对免疫小鼠血清 中PCV2抗体进行检测。结果显示 ，获得 了pGMCSF—ORF2 重组基 因，重组腺病毒载体构建成功，获得 了表达pGMCSF—ORF2融合蛋 白的重组腺病毒。该病毒免疫小鼠后 ，在小鼠血清中 检测到了PCV2的特异性抗体 。获得的重组腺病毒能有效表达pGMCSF—ORF2融合蛋 白，且可诱导小鼠产生针对 PCV2的特 异性抗体 。 关键词 ： 猪 Ⅱ型圆环病毒 ORF2 pGM—CSF 重组腺病毒 共表达 免疫效果 Co-expressionofRecombinantAdenovirusCarrying pGM —CSF，ORF2GeneofPorcineCircovirus Type2andImmunologicalAnalysis ChenJianghua LiuZhonghua LiWenping (CollegeofAnimalScience，HunanAgricultureUniversity，Changsha410128) Abstract： TherecombinantadenoviruscarryingchimericgenepGMCSF—ORF2wasconstructed，andtheexpressionleveland im— munogenicitywasanalyzed．ThepGM—CSF，ORF2 geneofPCV2wasamplifiedbyPCR．ThePCR productswerecloned intopMD18一T vectorafterchimeric．TheinterestinggenewassubclonedintotheshuttleplasmidofpAdTrackCMV．Therecombinantplasmidandade— novirusbackboneDNA wereCO．transformedintoE．colBJ5183afterdigestedbyPmeIandtherecombinantadenovirusgenomicDNA wasobtained，theexpressionlevelofwhichwasscreenedunderPCR，RT—PeR andW esternblotanalysis．ThenBabl／cmicewereimmu— nizedwith therecombinantadenovirus，detectedseraantibodyaboutPCV2ofthemicebyELISA method．W eobtainedpGMCSF-ORF2 gene，constructed thepad—GF2vector，andobtained therecombinantadenoviruscarryingpGMCSF—ORF2gene．Thespecificantibodya— boutPCV2hasbe