环氧合酶-2反义寡核苷酸对Colo-16细胞增殖及环氧合酶-2表达的影响.pdfVIP

20O9年 12月第 42巷第 l2期 ChinJDerl『a『tol，December2()09．Vo1．42．N0．12 835 · 论 著 · 环氧合酶一2反义寡核苷酸对 Colo一16细胞 增殖及环氧合酶一2表达的影响 马杰 魏志平 刘彦群 【摘要】 目的 研究环氧合酶(c0x)一2反义寡核苷酸(As0DN)对人皮肤鳞状细胞癌细胞株colo—l6 细胞体外增殖的抑制作用及 c0x一2表达的影响。方法 人工合成c0x一2As0DN，利用脂质体将不同浓 度 (50，1o0，20O，400nmol，IJ)反义寡核苷酸转染入 Colo一16细胞 ，免疫荧光显微镜观察转染情况 ；采用噻 唑蓝(M1丫r)法检测 C0lo一16细胞的增殖情况；westem印迹及半定量逆转录PcR检测 co1o一16细胞 C0x一2 蛋 白和mRNA表达水平。结果 不同浓度的c0x一2As0DN对 Colo—l6细胞体外增殖均具有抑制作用 (P0．05)，400nmol／L反义组在 48h抑制率最高 ，达 6O．3％；C0x一2As0DN转染 Col0一l6细胞后 ， c0x一2蛋F1和 mRNA表达 明显下调 ，50、l00、2OHD、400nmol门L组 C0x一2蛋 白灰度值分别为 0．763± 0．070、0．600±0．065、0．430±O．O74、0．251±0．045，与阴性对照组相 比差异均有统计学意义 (P0．05)； c0x一2mRNA表达量随 c0x一2As0DN浓度 的增加而减少 ，50、100、200、4o0nmol／L组 c0x一2mRNA 灰度值分别是O．778±0．025、0．602±0．04l、0．417±0．031、0．297±0．051，各组间 cOx一2mRNA表达差 异有统计学意义(F=132．48，P0．01)。结论 C0x一2As0DN对 Colo一16细胞的体外增殖有抑制作用， 并能下调c0x一2蛋白及其mRNA在 c0lo—l6细胞中的表达 ，提示 c0x一2As0DN有潜在治疗皮肤鳞状 细胞癌的作用。 【关键词】癌 ，鳞状细胞 ；环氧合酶2；寡核苷酸类 ，反义；细胞系，肿瘤；colo—l6细胞 Ih n0，e丘elctof∞dooxygenase (OOX)一2aI1廿sense01ig0nude deontllepr(1ufe瑚 0nand 唧 ressi0n 0fCOX-2 iIlhuman 凼 n squam0usceucarciIlOmaceu liIleC0l0-16 M， e，Ⅵ Zhi—ping，uU Yan—qun．Depanmentof Defn1atology，Am liated Hospitalof XuZhou M edical College， Xu 0u22 0D2，J妇ngsu，Chna C0 esp0ndngau抽or W匹 Zb—p抽 Ema订 xzwzpj96j(yaoo．co埘 ．cn A【bs虹act】0b1ecti、 Toinvestigatetheefj[-ectsofc0x一2antisenseoligo叫cleotide (As0DN)on thepro1iferationandexpressionofCOX一2inhumanskinsquam0uscel1carcinomacel11ineCo1o—l6．M e廿lods TheC0X一2As0DNwassvnthesizedartmcia11v，andvariousconcen仃ations (5O，10O，200，4O0nm01／L)of theAs0DN weretransfected intOCOlO一16ce1lswith lipofectin f0llowedby additiOnalcu1turef0rdi rent durations．Thetransfection resultswereobserVedwithnuorescencemicrosc0py．Subsequent1y，MTT assay， Westem b1ottingandreversetranscripti0nPCRwereusedtodetectthecel1pro1ifration，pr0teinandmRNA expressionofa X一2inCo