用于体外基因转染的氨基硅烷Fe3O4复合纳米粒子的合成及表征.pdfVIP

Vo1．30 高等 学校 化 学学报 No．12 2009年 l2月 CHEMICALJOURNAIOFCHINESEUNIVERSITIES 233l～2336 用于体外基因转染的氨基硅烷 Fe304 复合纳米粒子的合成及表征 李文章 ，李 洁 ，谭泽明 (1．中南大学化学化工学院，长沙 410083；2 中南大学湘雅医院神经外科 ，长沙 410078) 摘要 利用2一吡咯烷酮和乙酰丙酮铁为原料制备Fe0 磁性纳米颗粒，用 XRD和TEM对样品进行了表征． 选择偶联剂 一氨丙基三乙氧基硅烷 [NH：c3HSi(OCH)]对纳米粒子进行表面修饰，制得AFIqXS／Fe，O 复 合载体材料．以此复合粒子作为传递载体，将CD基因转染U251胶质瘤细胞．采用RT—PCR，Westernblot及 免疫荧光等方法检测CD基因的表达及功能．结果表明，制备的Fe，O 颗粒粒径为8—10nm，结晶度较高； 经表面修饰后，粒子表面负载一0H，一NH，一NH ，一c一0和一c一0H等多种功能基团．DNA结合分析及 DNase．1消化结果表明，AFIqS／FeO 粒子能够有效地结合和保护DNA．体外细胞转染实验证实，该复合纳 米颗粒能够高效地传递 CD基因进入U25l胶质瘤细胞 内，并进行稳定表达． 关键词 纳米四氧化三铁；磁性材料；体外转染；基因载体 中图分类号 ()614；O641 文献标识码 A 文章编号 0251-07902《009)12-2331-06 近几年来，磁性纳米粒子在生物分离、靶向给药、医学诊断、DNA分离及转染等方面都有着广泛 的喧用前景 ～．在众多磁性纳米微粒中，FeO 是一种磁性强、制备相对简单而且生物相容性较好的 磁性材料，是生物医学领域常采用的磁性载体材料．以往制备纳米Fe，O 大部分采用的是共沉淀法 、 微乳液法 、超声分解法 m和溶液化学法 ，但这些方法制备出的FeO 纳米颗粒粒径不均一、结晶 度较差且磁响应脆弱．高温分解铁有机物法是将铁前驱体 [如FeCup，，Fe(acac)，Fe(c0)] 卜”。高 温分解得到铁原子，由铁原子生成铁纳米颗粒，再将铁纳米颗粒控制氧化得到Fe0．此方法制得的纳 米颗粒结晶度高，粒径可控且分布较窄，缺点是颗粒的水溶性较差，限制了其在生物医学方面的应用． 2一吡咯烷酮是药物合成常用的中间体，具有高沸点和强极性等性质，选用其作为反应热介质，以 乙酰丙酮铁 Fe(acac)，为原料，制备出了高结晶度和分散较均匀的水溶性Fe0 纳米粒子 ．再利用 一 氮丙基j=乙氧基硅烷 ”对其进行修饰，合成了氨基硅烷纳米复合粒子(APTrS／FeO)，并以胞嘧啶 脱氮酶(Cytosinedeaminase，CD)自杀基因作为靶基因，评价A[WFS／FeO 在体外作为基因载体的可 行陆． 1 实验部分 1．1 试剂与仪器 2一吡咯烷酮(CHON)(医药级，博爱新开源制药有限公司)；乙酰丙酮铁 [Fe(CHCOCHCO · CH)，]和 一氨丙錾 三『乙氧基硅烷 [NH：C，HSi(OC2H )，](分析纯，美国NewJersey公司)；丙酮 (CtI，COCH )、无水乙醇(CHCHOH)和甲醇 (CHOH)(分析纯，湖南师范大学试剂厂)；RT—PCR试 剂盒(Takara公司，日本)；绵羊抗CD多克隆抗体(SheeppolyelonaltoCytosinedeaminase)(Abcam公 州)；荧光素标记兔抗羊 IgG(RabbitantisheepIgG／FITC)(SCBT公司)；细胞培养基 DMEM、胎牛血清 和G418(Sigma公司)；pCMVCD质粒 由13本Yoshimura博士构建并惠赠；DNAMarker(北京天为时代生 物技术公司)；U251人脑多形性胶质母细胞瘤细胞由中南大学湘雅医学院细胞 中心提供 ；总蛋白提取 收稿 日期：2009-03-06． 基金项 目：教育部新世纪优秀人才资助计划 (批准号：NCET-05-0691)和湖南省重大科技计划项 目(批准号：2008SK1001)资助． 联系人简介：李 洁，女，博士，教授，博士生导师，从事物理化学及无机材料合成与性能研究．E-m