人AADC基因在cos39;7细胞中的表达和活性检测.pdfVIP

_‘+ 人!!# 基因在$%’( 细胞中的表达和活性检测 杨 慧 赵焕英 张 智 段德义 蔡 青 徐群渊 （首都医科大学北京神经科学研究所 北京市神经再生修复重点实验室，)***+, ） 〔摘要〕 目的 研究人芳香族左旋氨基酸脱羧酶 （ ）基因在多巴胺代谢过程中的作用。方法 从人胎儿黑质 !!# 组织中提取总-.!，以-/’0#- 法扩增!!# $.! 片段，克隆于1234’/ 载体中。测序正确后再构建真核表达载体，转染 猴肾成纤维细胞 ，原位杂交检测 表达，加入 后，用高效液湘色谱测定转 细胞的多巴胺 （ ）生 #56’( !!# 7’50! !!# ! 成量，以了解转基因细胞 基因的功能活性。结果 扩增出 的 片段与 ［ ］登录的 !!# -/’0#- ),,891 $.! 2:;9;= .4***(* 序列相同，构建真核表达载体1?@’-6A’!!#，原位杂交证实其在#56’( 表达阳性率为(* B C D* B ，在!!# 活性作用下实 验组的 生成量是对照组的 倍以上 （ ）。结论 所克隆的 基因可在真核细胞中表达并具有生物活性。可望 ! , ! E * F*) !!# 用于帕金森病的基因治疗。 〔关键词〕 芳香族左旋氨基酸脱羧酶； 帕金森病； 基因治疗； 原位杂交 〔中图分类号〕 - 〔文献标识码〕 ! !#$!%%’( ’) *+,-( --./ 0!(! ( /’%1( /!22% -(. -%%-3 ’) 4% -/4543 ， ， ， ， ， G;H IJK LM% IJ;NK;H LM;H LMK J; :NK #K OK;H PJ OJ;NJ; （ ， #$% $’ ()*$*+*# ,- .#+/,)0$#0# 12 #$% $’ 3#*#/ ,- .#+/14 5#’##/1*$, 12 5#61$/$’ ， ， ） 316 $*14 7$8#/)$*9 ,- :#2$014 ;0$#0#) #$% $’ )***+, 3$1 〔 〕 （ ） -6789:;8 59Q:$RKS: /% K;S:RKHR: RM: T%U: %V MJW; T%WRK$ WK;% $KX X:$T9%YNU: !!# K; RM: （ ） W:R9%UKW %V X%1WK;: ! Z 4:RM%X /M: R%RU -.! [ K%UR:X VT%W V:RU 9TK; Z -/’0#- [ 1:TV%TW:X 9N JK;H 1:$KU 1TKW:T %V !!# Z /M: $.! VTHW:;R %V !!# [ UKHR:X K;R% 1UWKX 1234’/ Z !; :Y1T:K