主要梨品种细胞质遗传多态性分析.pdfVIP

主要梨品种细胞质遗传多态性分析 摘 要 梨属于蔷薇科的梨亚科，品种很多，长期以来在分类上存在很多的问题。本论文的目的是研究 主要梨品种细胞质遗传多态性。采用PCR-RFLP方法，对提取出的总DNA用10对叶绿体通用引物进行扩 增，对PCR产物用限制性内切酶AluI，HaeIII，HinfI，Hin6I，RsaI，MvaI 和TaqI进行酶切，对19 种梨（包括新疆梨系统、白梨系统、西洋梨系统、秋子梨系统、杜梨、沙梨系统）的叶绿体基因组 trnS-trnfM非编码区进行克隆、测序。应用DPS v7.05和DNAMAN、DNAStar、ClustalX-1.83、PHYLIP -3.68软件进行分析。通过序列比对，再进行聚类分析，最后依据所得结果确定所测分子序列的亲缘 关系，构建系统进化树。 结果显示：10 对引物中只有 7 对（cp01，cp 02，cp 03，cp 04，cp 06，cp 09，cp 10）能在 梨属植物上扩增出一条特异性谱带，这说明梨属植物叶绿体基因组序列十分保守，3 个引物对（cp05， cp07，cp08）不能在梨属植物上扩增出谱带。931 份引物对/酶切组合中，cp09/MvaI，cp03/Hin6I 的酶切位点有显著差异。 对梨属植物的cpDNA trnS-trnfM 区域进行克隆、测序，所得的序列长度为: 库尔勒香梨和鸭梨 的序列最长（1642bp），苹果梨、早酥梨、慈梨、象牙、翠伏的序列最短（1272bp）。 用DNAMAN 软件对序列进行比对分析：库尔勒香梨与白梨系统的同源性为：85.01%，与新疆梨系 统的同源性为：78.60%，与西洋梨系统的同源性为：78.28%，与沙梨系统的同源性为：77.47%，与 秋子梨系统的同源性为：77.91%。 根据ClustalX 软件完全比对的结果，用PHYLIP -3.68 软件的邻接法对cpDNA trnS-trnfM 区域 序列变异位点构建系统进化树。黑酸梨和京白聚为一类，伏茄和身不知聚为一类，冬巴和新世纪聚 为一类。库尔勒香梨和新疆句句梨、金川雪梨、京白、黑酸梨聚为一类。 本实验的主要结论：库尔勒香梨与苹果梨，鸭梨，早酥，慈梨，砀山梨，金川雪梨，新疆句句梨， 锦丰的平均距离系数较小，与其他梨的平均距离系数较大。 早酥是苹果梨和身不知杂交出来的品种。早酥与苹果梨的同源性为：99.45%，与身不知的同源 性为：97.76%。锦丰是苹果梨和慈梨杂交出来的品种。锦丰与苹果梨的同源性为：78.76%，锦丰与 慈梨的同源性为：78.71%。和父本相比，后代和母本的同源性较高。库尔勒香梨在与18 种梨的序列 比对中，和砀山梨的同源性最高为：98.36%。库尔勒香梨与白梨系统和新疆梨系统的亲缘关系较近， 与沙梨系统和秋子梨系统的亲缘关系较远。 因此，本实验的意义是结合分子生物学和生物信息学对19 个梨品种进行细胞质分析，搞清白梨 系统、新疆梨系统、西洋梨系统、杜梨、沙梨系统和秋子梨系统的胞质基因的遗传多样性。以期为 研究梨属植物亲缘关系提供进一步的遗传学证据。 关键词：PCR-RFLP ；梨；DPS ；遗传多态性；cpDNA I 主要梨品种细胞质遗传多态性分析 Abstract There were many species of Pyrus . Because many interspecific hybrids were fertile,there were so many questions on Pyrus relationships for a long time.This experiment researched on the genetic diversity of nineteen cultivars in Pyrus derived from cpDNA PCR-RFLP.Ten universal primer pairs of chloroplast genome were used to amplify cpDNA non-coding regions in nineteen Pyrus species. The