骨髓干细胞动员剂治疗急慢性肝损伤的实验研究.pdf

中文摘要 骨髓干细胞动员剂治疗急慢性肝损伤的实验研究 摘 要 目的：观察重组人粒细胞集落刺激因子(recobinant human stimulat granulocytecolony ing 对CCl4所致急、慢性肝损伤的保护及治疗作用，探讨hrG—CSF 动员的骨髓干细胞在受损肝脏组织内定植的能力，为临床治 疗重型肝炎、肝硬化等终末期肝脏疾病提供新的手段。 方法：清洁级雄性BALB／C小鼠，体重21-249，随机分 组。 1．亚急性肝损伤实验，随机分为预防组与造模组，各15 射，在应用CCl4肝损伤前先连续治疗7天，以后每周一、 周二、三、四皮下注射治疗药物，共4周。 2．为观察hrG—CSF对外周血细胞的影响，用小鼠21只， 血检测外周血CD34+细胞计数、血常规。 3．慢性肝损伤实验，40％CCl42ml／kg每周2次腹腔注射， 持续70天。预防组25只，在应用CCl4前先 连续应用5天；模型组52只应用生理盐水。 4．在治疗性实验中，上述慢性肝损伤实验中制备的动物模 型，随机分为治疗组和对照组，各18只，治疗组给予 中文摘要 理盐水，分别于肝硬化模型制备终止8天、15天、30天处 死动物。 5．为证实外周血干细胞可以定居于受损伤的肝脏，取雄性 取外周血分离单个核细胞，用于给雌性肝损伤小鼠间断提供 次，上述雄性小鼠单个核细胞尾静脉注射，每周2次共3 周，自最后一次移植30天后处死并行Y染色体原位杂交。 6．血常规、肝功能、肝纤维化指标及超氧化物歧化酶、丙 二醛含量采用临床常规方法。病理检测用10％福尔马林固定 脏器，常规应用HE染色及苦昧酸一天狼猩红染色，显微镜观 察。Y染色体原位杂交、Thy-i免疫组化及CD34流式细胞分 析均按有关试剂盒说明或常规方法进行。 结果： 1．一般情况：在亚急性肝损伤实验：预防组小鼠与对照组 相比，死亡率(13．3％)明显低于对照组(46．7％，PO．05)； 慢性肝损伤实验，在模型制备的过程中，预防组死亡率(4％) 也明显低于模型组(23％，PO．05)，模型制备终止时，预防 组小鼠的体重明显高于模型组(PO．01)。 2．HE染色及苦味酸一天狼猩红染色观察：亚急性肝损伤实 验治疗组与对照组相比，肝细胞脂肪变性、肝细胞坏死及炎 性细胞浸润均有减轻(P0。05)。慢性肝损伤实验模型组肝 脏组织正常小叶结构破坏或消失，由粗大的胶原纤维条索分 割肝小叶形成假小叶，预防组纤维化程度与之相比明显减轻 (PO．05)；模型制备终止一个月时，治疗组肝脏病变恢复 较对照组明显改善(PO．05)。 中文摘要 3．免疫组化：Thy-1阳性着色定位于细胞膜与细胞浆，呈 棕黄色均匀弥漫。在肝硬化模型制备终止时，hrG—CSF预防 组在汇管区、中央静脉周围可见较多Thy一1阳性细胞，肝小 叶内散在Thy一1阳性细胞，模型组在汇管区发现少量的 Thy一1阳性细胞；治疗组于8、15天时汇管区可见Thy一1阳 性细胞逐渐增多，与对照组比有显著性差异(PO．05)。 4．流式细胞分析：hrG—CSF动员后，外周血CD34+细胞数与 外周血中的中性粒细胞、单核细胞分别成直线线正相关，相 型制备终止时，预防组肝组织中CD34+细胞显著高于模型组 有显著性差异(PO．05)。 5．Y染色体原位杂交结果证实外周血干细胞能在受损肝脏 内较多定植及脾脏内少量定植，但未见在心、肺、肾中表达。 6、亚急性肝损伤实验，预防组ALT、AST、SOD显著高于模 损伤预防和治疗实验：hrG—CSF预防组或治疗组ALT、AST、 HA和LN均显著低于对照组(p0．os)。 结论： 1．hrG-CSF能提高CCl4所致的急慢性肝损伤小鼠的生存率。 功能，促进CCl4所致肝硬化的恢复。 3．Thy-1的免疫组化及CD34细胞流式细胞分析，提示骨髓 干细胞及肝内干细胞都可能参与严重肝损伤的修复。 4．Y染色体原位杂交结果证实，外周血干细胞能在受损肝 脏内较多定植及脾脏内少量定植。 中文摘要 5．hrG—CSF动员自身骨髓干细胞对CCl4所致的小鼠的急慢 性肝损伤安全、有效。有望为重症肝炎、终末期肝硬化等难 治性肝病的治