卡介苗（BCG）有效成分及Ag85B免疫调节机制的实验研究.pdfVIP

中文摘要 的实验研究 摘 要 目的：提取、分离、纯化并且鉴定BCG的有效成分， 分析BCG不同有效成分及A985B对小鼠脾淋巴细胞的增殖 作用及诱导小鼠淋巴细胞产生细胞因子的作用探讨卡介苗、 其有效组分及A985B的免疫调节活性。 方法：l采用MTT法测定不同浓度的卡介苗对小鼠脾淋 巴细胞的增殖作用。2采用ELISA方法检测经过不同浓度卡 介苗作用后诱导小鼠脾淋巴细胞分泌IL一2、TNF．仪、INF—v 等细胞因子的含量。3采用酶裂解法和超声波破碎法对BCG 进行裂解，提取其活性蛋白成分。4采用紫外吸收比色法测 定提取蛋白的纯度；应用考马斯亮兰G250方法测定提取物 的蛋白含量。5采用葡聚糖凝胶层析方法对BCG提取物进行 组分分离。采用SDS—PAGE凝胶电泳方法对层析后的BCG GES 提取物进行纯度及分子量的鉴定。r6将构建的P 苷(IPTG)诱导重组蛋白的表达，包涵体变性后经梯度浓度尿 素复性，GST 和层析纯化(本过程均在日本大阪高分子化学实验室完成)。7 巴细胞的增殖作用，同时采用ELISA方法检测经过BCG有 效提取成分及A985B诱导作用后小鼠脾淋巴细胞分泌IL．2、 中文摘要 关数据进行统计分析。 结果：l体外增殖试验表明：在体外培养的小鼠脾淋巴 淋巴细胞的增殖促进作用不明显，其PI值为1．02。而加入浓 胞的增殖(PO．01)。而且，这种促进作用会随着BCG的浓 度增加而显著增强。在浓度为3．6×106cfu／ml时，其PI值达 到最大值6．82。2BCG能够诱导小鼠脾淋巴细胞产生IL一2、 BCG对小鼠脾淋巴细胞没有诱导作用；当BCG浓度大于3．6 ×104cfu／ml时。BCG对小鼠脾淋巴细胞才有诱导作用，而 且随着浓度的增加细胞因子的浓度也不断的提高。在浓度为 提取其活性蛋白成分。经过紫外吸收比色方法测定其蛋白纯 提取物总蛋白含量为9．8mg／ml。4采用葡聚糖凝胶层析方法 对BCG进行分离纯化以后可以得到三个组分BCGEl、 BCGE2、BCGE3，对其分子量进行测定可知三组分的分子量 分别为42．3kDa、36．7kDa、28．4kDa。5 BCGEl在32099／ml 浓度以下对小鼠脾淋巴细胞无促增殖作用，同时也不能诱导 在32099／ml浓度以上对小鼠脾淋巴细胞具有一定的促进增 殖作用(PO．05)；能诱导小鼠脾淋巴细胞分泌少量的细胞因 BCGE。对小鼠脾淋巴细胞的增殖指数为1．35，诱导小鼠脾淋 中文摘要 88．39pg／ml和1 时就可以刺激小鼠脾淋巴细胞进行增殖和产生IL一2、TNF．0【、 巴细胞的增殖指数为7．16，诱导小鼠脾淋巴细胞产生的IL一2、 o．．13 TNF—Cc、INF一1，分别为139．53pg／ml、12pg／ml和34．62 增殖指数为4．72，诱导小鼠脾淋巴细胞产生的IL一2、TNF一0【、 INF一丫分另lJ为104．14 pg／ml和31．84 pg／ml、100．31 pg／ml。 诱导作用最大，对小鼠脾淋巴细胞的增殖指数为7．41，诱导 pg／ml、128．49pg／ml和42．63pg／ml。通过BCG、BCG有效 组成成分及A985B各组数据的统计分析，A985B对小鼠脾 淋巴细胞的增殖作用及诱导产生IL．2、TNF一仪、INF—Y的作用 最强(P0．01)。 结论：1卡介苗对于小鼠脾淋巴细胞的增殖及诱导细胞 因子的产生具有促进作用，而且，这种作用具有一定的剂量 效应关系。2BCG及其有效提取成分和A985B对小鼠脾淋 巴细胞都具有促进增殖的作用，而且随着浓度的增加这种促 进作用不断增强。当卡介苗提取物浓度达到640肛g／ml时， 这种增殖作用最强；A985B浓度达到10099／ml时，这种增 3