谷氨酰胺转胺酶的分离纯化及酶学性质.pdfVIP

第 21 卷第 6 期 无 锡 轻 工 大 学 学 报 Vol. 21 　No. 6 　 　 　 　　　　 　 2002 年 11 月 Journal of Wuxi University of Light Industry 　 　 　　　　 Nov. 　2002 ( ) 文章编号 :1009 - 038X 2002 06 - 0564 - 05 　 谷氨酰胺转胺酶的分离纯化及酶学性质 鲁时瑛 , 　周楠迪 , 　堵国成 , 　李华钟 , 　陈 坚 (江南大学 生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室 ,江苏 无锡 214036) 摘 　要 : 茂原链轮丝菌 S t reptoverticillium mobaraense 所产生的谷氨酰胺转胺酶发酵液通过抽滤、 超滤、乙醇沉淀、离心和冷冻干燥 ,制得粗酶粉的酶活约为 1 033 U/ g. 对粗酶研究发现 ,该酶的最 适反应温度为 52 ℃,最适 p H 为 6. 0 ;粗酶的 p H 稳定范围在 4～8 ,温度稳定范围在 20 ～40 ℃,离 子强度对该酶的活性稍有影响. 粗酶经 CM纤维素层析和 Sephadex G75 凝胶过滤层析后得到较 纯的酶 ,通过 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳检验蛋白质纯度 ,得到较弱的单一区带. 其中 ,CM纤维素 层析的纯化倍数为 4. 5 ,收率质量分数约为 78. 8 % ;凝胶过滤层析纯化倍数为 1. 11 ,收率质量分数 为 50 % ;用凝胶过滤法测得谷氨酰胺转胺酶的相对分子质量为 40 092. 关键词 :谷氨酰胺转胺酶 ; 纯化 ; 酶学性质 中图分类号: Q 55 文献标识码 : A Purif ication of Transglutaminase and Properties of Crude Enzyme L U Shiying , 　ZHOU Nandi , 　DU Guocheng , 　L I Huazhong , 　CHEN Jian ( Key Laboratory of Industrial Biotechnology under Ministry of Education , School of Biotechnology ,Southern Yangtze U niversity , Wuxi 214036 , China) Abstract : Transglutaminase ( TGase) was isolated and purified from the culture filtrate of a strain of S t reptoverticillium mobaraense . The properties of the crude enzyme were studied. The crude enzyme was prepared by filtration , ultrafiltration , precipitation by 95 % alcohol , centrifugation and freeze drying. The specific activit y of the crude enzyme was about 794 U/ g. The optimal temperature and p H were 52 ℃and 6. 0 , respectively. The crude enzyme was stable below 40 ℃and within p H 4. 0～ 8. 0. The i