酶解猪血蛋白中活性肽的纯化和功能研究.pdfVIP

V o l. 26 高 等 学 校 化 学 学 报 　 N o. 1　 2 0 0 5 年 1 月 　　 　　　　　CH EM ICAL JOU RNAL O F CH IN E SE UN IV ER S IT IE S　　　　　 　　 6 1～ 63　 酶解猪血蛋白中活性肽的纯化和功能研究 1 2 1 李艳伟 , 江　波 , 佟祥山 ( 1. 吉林大学生命科学学院, 长春 130023; 2. 长春生物制品研究所, 长春 13002 1) 摘要　利用层析、超滤等生物化学手段纯化猪血胰蛋白酶水解液, 得到的目标产物是一种在高压液相色谱 水平上的纯品, 分子量大约为 3 000 的小肽. 利用 T 淋巴细胞转化实验和 E 花环形成实验确定 目标小肽的 存在, 并分别采用体内、体外的免疫学和药理学实验, 初步确定了目标小肽对机体免疫活性的增强性质. 关键词　 生物活性肽; T 淋巴细胞转化实验; 猪血胰蛋白酶 中图分类号　 7 1　　　　文献标识码　 　　　　文章编号　025 10790 (2005) 0 1006 103 Q A 新鲜猪血被胰蛋白酶彻底水解后, 产物是一种对机体具有免疫增强活性及长度不等的小肽混合 物. 本文利用 Sep h adex G25 凝胶层析、阳离子交换层析、超滤除盐及高压液相色谱等方法, 对该混合 物中的有效组分进行分离提纯, 并利用体外 T 淋巴细胞转化实验和 E 花环形成实验跟踪监测每一步 产物的免疫增强活性, 最终得到在高压液相色谱水平为纯品的目标产物 一种具有免疫增强活性的 小肽. 为了证明它具有显著提高机体免疫防御功能, 针对免疫系统中 淋巴细胞、 淋巴细胞和 T B N K 细胞, 进行 淋巴细胞转化实验、 花环形成实验及 细胞杀伤毒性试验等体外免疫学实验, 针对 T E N K 小鼠以不同的给药方式和给药剂量进行了体内药理学实验, 并初步确定了目标小肽的免疫增强作用. 1　实验部分 1. 1　试剂与仪器 ( ) ( ) ( ) 新鲜猪血 25 kg , 胰蛋白酶 T ryp sin , D ifco 产品 , PB S 缓冲溶液 pH = 74 : 质量分数为 08% 的N aC l, 002% 的 KC l, 036% 的N a2H PO 4 ·12H 2O , 0024% 的 KH 2 PO 4 和 002% 的N aN 3; H C l ( P rop ano l 溶液、磷酸二氢钠和磷酸一氢钠配成缓冲溶液 缓冲溶液A 的pH = 4 8; 缓冲溶液B 的pH = )