人染色体8p22区SH-%2c2-信号蛋白家族新成员——SH-%2c2-A基因的克隆及其特性分析.pdfVIP

NN表达情况及该基因与肿瘤的关系。 f实验材料 1．人肝cDNA 2．外显子捕获系统 3．基因克隆相关分子生物学试剂 4．Northern杂交及RT—PCR相关试剂 5．正常组织及肿瘤组织 实验方法 利用捕获的外显子进行BLAST同源性分析，之后采用外显子 拼接技术克隆新基因，利用RT—PCR及Northern印迹杂交检测该 基因的组织表达情况，同时以B—actin作内对照。 结 果 利用外显子HC8exBl3，exBl0，exBl8拼接成一个开放阅读框 架为510bp的序列，BLASTN同源性分析可知与推测基因 AK024799相似(510／510)。关于推测基因的定位、结构和功能均 未报道，因此对其进行特性分析，该基因cDNA全长2．8kb，跨越 基组DNA8kb，其编码的蛋白质有454个氨基酸，含有一个SH：结 构域，因此称该基因为SH：A(SH：alone)，定位于8p22。编码的蛋 白质分子量57，726道尔顿，等电点为8．09。sH，A基因产物作为 SH：信号蛋白家族的新成员，在酪氨酸蛋白激酶相关受体介导的 信号传导中起一种接头蛋白的作用。 RT-PCR及Northern印迹杂交发现SH，A在多种组织中有表 ·2· 达，有3个转录本，而且在癌及癌旁组织的比较中发现，肿瘤组织 中表达较高，初步证明与肿瘤的发生有关。 讨 论 1．SH，A基因的结构分析和组织表达 利用外显子HC8 架为510bp的序列，BLASTN同源性分析可知与推测基因 内含子组成，编码的蛋白质有454个氨基酸，含有一个SH：结构 质分子量57，726道尔顿，等电点为8．09。 sH2A是sH：信号蛋白家族的新成员，在酪氨酸蛋白激酶相 关受体介导的信号传导中起一种接头蛋白的作用。而且RT—PCR 及Northern印迹杂交发现SH：A在多种组织中有表达，有3个转录 本，大小为2．8kb、i．8kb和1．3kb。 2．SH，结构域信号蛋白 homology SH，(see 2)结构域是由100个氨基酸组成的保守序 列，在许多细胞内信号蛋白中发现了相似序列，它们因与Src基因 表达产物Sre蛋白有相应的结构域而得名。具有SH：结构域的蛋 白质构成了一类蛋白质家族，在酪氨酸蛋白激酶相关受体介导的 信号转导过程中起枢纽作用，有学者将SH：结构域视为”蛋白质 识别密码”，表示它控制和预测蛋白质-蛋白质的相互作用。因此 sH：A基因产物作为SH：蛋白家族新成员，在信号传导中发挥作 用。 3．SH，A与肿瘤的关系 酪氨酸残基的磷酸化是SH：结构域行使功能的先决条件，而 酪氨酸激酶和磷酸酶同时受磷酸化调节，因此SH：可介导激酶活 ·3· 性也可介导磷酸酶活性，有人认为激酶活动性升高与肿瘤发生相 关而磷酸酶的活动性升高可以抑制肿瘤产生，因此它们的结合才 产生协调的生命活动。 s心家族蛋白的过表达可以使胞质中酪氨酸激酶活性增强， 也可以抑制酪氨酸磷酸酶的活性，最终造成细胞增生甚至肿瘤发 生。我们选择了几例不同癌组织和癌旁组织，应用RT—PCR和 Northern印记杂交进行了sH：A表达的定量分析，其结果显示5／7 癌组织sH：A基因表达有明显增加，初步证明与与肿瘤发生有一 定关系，因此必须进一步扩大病例来阐明SH：A基因与肿瘤的关 系。 小 结 人类基因组计划完成之后，已进入后基因组学阶段，疾病基因 的定位克隆已成为研究的重要内容。外显子捕获是在易感位点分 离疾病候选基因的重要途径之一。因此利用外显子捕获及外显子 拼接技术，在8p22区域得到一个510bp序列，序列比较分析可知 与推测基因AK024799某一段完全相似。通过对该基因的结构和 而且仅有一个sH：结构域，因此称这个新基因为SH：A，定位于 8p22。它的产物作为sH：信号蛋白家族的新成员，在酪氨酸蛋白 激酶相关受体介导的信号传导中起作用；利用RT．PCR及Northern