酶催化直接糖基化制备p-羟基苯乙基β-D-葡萄糖苷.pdfVIP

维普资讯 第 23卷第 4期 化学反应工程与工艺 Vol23．No4 2007年 8月 ChemicalReactionEngineeringandTechnology 文章编号 ：1001--7631 (2007)04—0332—05 酶催化直接糖基化制备 p一羟基苯乙基 D一葡萄糖苷 刘 磷 梅乐和 吴 杰。 姚国华 陈伟亮 (1．浙江大学材料与化学工程学院，浙江 杭州 310027； 2．浙江工业大学生物与环境工程学院，浙江 杭州 310032) 摘要： 研究了水一有机溶剂体系中 葡萄糖苷酶催化直接糖基化反应制备 一羟基苯乙基 葡萄糖苷，考 察了反应体系、水分活度 (n)、反应温度和 D一葡萄糖与 一羟基苯 乙醇摩尔 比对酶稳定性及产率的影 响。实验结果表明，在水一乙腈、水一1，4一二氧六环和水一1，2一二乙酰氧基乙烷体系中均可进行直接糖基化反 应。在水一1，2一二乙酰氧基 乙烷体系中，合适 的反应 条件为 p一羟基苯 乙醇0．6mol／L， D葡萄糖 0．2mol／L，酶量3．6mg／10mL，d 为0．76，52℃，pH值6．2，280r／min，反应 26h后产率达到 2o．66 。随反应时间增加，产物抑制和酶稳定性降低程度 明显增加，限制了产率的提高。 关键词 ： 葡萄糖苷酶 ；水-有机溶剂体系；直接糖基化 ；p-羟基苯乙基 I)_葡萄糖苷 中图分类号 ： TQ426．97 Q555+．4 0629．13 文献标识码 ：A 利用糖苷酶催化直接糖基化 (g1ucosy1ation)或转糖基 (transg1yco1ysis)作用 ，可制备活性糖苷 或改善糖苷配体的理化性质_1]，直接 以醇为糖苷受体和反应介质制备各种糖苷取得 了较好的效果_2]。 但直接糖基化反应平衡趋 向于水解而使反应转化率较低 ，而且对于在水 中溶解度不高的糖苷受体，通 常的反应体系应用受到限制。因此，有必要构建新型反应体系，探讨底物适用性和反应条件 ，提高反 应转化率，以拓宽酶催化直接糖基化反应制备糖苷的应用条件和范围。户一羟基苯乙基 D一吡喃葡萄糖 苷 (一hydroxylphenylethanol D—glucoside)是一种天然产物 ，具有多种生物活性_l3]。用微生物或 细胞培养法制备的研究已有报道_4]，但产率低 ，目标产物纯度较低 ，预期生产成本过高 ，实际应用 受到限制。利用水一有机溶剂反应体系，以户一羟基苯乙醇为糖苷受体进行直接糖基化反应制备 户一羟基 苯乙基一D一吡喃葡萄糖苷，可改善糖苷受体在水中溶解度低的问题L6]。Tong等 [7报道了用苹果籽葡 萄糖苷酶 (5-glucosidase)在水一1，4-二氧六环体系中催化制备 户一hydroxylphenylethanolD—glucoside的 方法，转化率为15．8 。本研究选择分别在水与乙腈 (acetonitrile)、1，4二氧六环 (1，4-dioxane) 和1，2一二乙酰氧基乙烷 (1，2一diacetoxyethane)构成 的体系中利用 -5glucosidase催化制备 户一hydroxyl pheny1ethanolpD—glucoside，探讨其反应规律，为建立有效的酶催化反应体系提供依据。 1 实验部分 1．1 实验材料 苦杏仁 葡萄糖苷酶 (Almond-5glucosidaseG0395)为 Sigma公司产品，活力5．6U／mg，在 一 18℃保存；户一羟基苯乙基-5D一葡萄糖苷 ，中国药品生物制品检定所 ，批号 818—9401；户一羟基苯 乙 醇为Merck公司产 品；所用其它试剂均为分析纯。缓冲液 以去离子水配制，使用前 以浓度为 收稿 日期 ：2007～03—07；修订El期：2007—05-O8 作者简介 ：刘 磷 (1956一)。男 。副教授。E—mail：linliu@mail．hz．zj．an