马鹿精子体外获能前后超微结构变化的研究.pdfVIP

第四部分繁殖育种篇 马鹿精子体外获能前后超微结构变化的研究 李秋玲 李和平 (东北林业大学 哈尔滨150040) TheUltrastructuralVariationof Wapiti(Cervuselaphus)SpermDuring Its InVitro Capacitation LI LI Qiu-lingHe-ping (Northeast 150040) ForestryUniversity,Harbin 摘要：获能处理前后的马鹿精子经固定、脱水、置换、包埋和聚合，用超薄切片机切片，再用醋酸双 氧铀、柠檬酸铅染片，最后于透射电镜下观察其超微结构的变化．结果表明：在电子显微镜下，马鹿 精子由头部、颈部和尾部3部分组成，头部呈棒状，绝大部分被浓缩而电子密度较高的精核所占据； 顶体似帽状扣在精核之上，约占头部的2／3左右，其前部较为膨大；颈部位于头部和尾部之间，该区 域较短；尾部可分为中段、主段和终段；马鹿尾部轴丝的结构类型为“9+2”，终段的微管结构类型为 “9+9+2”；马鹿精子获能前，精子头部质膜和顶体完整；精子获能后，有的顶体质膜局部膨胀并呈 泡状，有的断裂和丢失，顶体膨胀，外膜内陷囊泡化。不同培养液处理的获能精子，超微结构无明显 差异． 关键词：鹿；精子；体外获能；顶体反应；超微结构 关于鹿精子超微结构研究，冯怀亮等(1991)利用电子显微镜对东北梅花鹿精子进行超微结构研 究发现，东北梅花鹿精子的超微结构与其它哺乳动物精子结构基本相似，区别主要在于东北梅花鹿精 子顶体前部较为膨大，头部较长，中段和主段之间有明显的环状结构等。杨智和赵世臻(1998)利用 光学显微镜和电子显微镜对冷冻前后的梅花鹿精子的形态和超显微结构进行了观察，测得梅花鹿精子 的全长和各段长，并总结了梅花鹿精子超微结构的几个特殊点，结果还发现冷冻处理可使梅花鹿精子 顶体膨胀，顶体内容物丢失，顶体外膜自身囊泡化，线粒体发生断裂和丢失，冷冻后的梅花鹿精子畸 形率极显著增高。关于马鹿精子超微结构特别是精子体外获能过程中超微结构的变化及其规律的研究 尚未见报道。 本研究在借鉴哺乳动物精子体外获能的理论与技术手段的基础上，结合鹿的生理、繁殖功能方面 的特性，在开展了对马鹿精子体外获能研究的基础上，利用电镜技术与其它辅助技术相结合，对马鹿 精子体外获能过程中的超微结构进行研究，以期阐明马鹿精子的特性，为揭示精子在受精过程中发生 的一系列变化的反应机制提供科学的数据，从而为推进鹿受精生物学的发展奠定基础。 ·163· 1材料与方法 1．1实验材料 马鹿细管冷冻精液购自黑龙江省农垦科学院哈尔滨特产研究所种鹿场，所购冻精采自天山马鹿种 鹿01．23号，每管冻精容量为0．5ml。 1．2研究方法 本试验研究中均采用上浮法并以不同人工获能液诱导马鹿精子体外获能，利用透射电子显微镜 (TEM)技术研究马鹿精子获能前＼后超微结构变化，以及不同培养液对精子超微结构的影响。透射 电镜超薄切片样品制备及其检测程序如下： 前固定：将获能处理前后的精子悬液分别用磷酸盐缓冲液洗涤三次(每次离心为10000rpmX 待样品收集完全后统一进行后续操作。样品的保存时间应尽量缩短，以不超过15天为宜。 10rain)。 冲洗：用磷酸缓冲液(pH7．2)冲洗三次(每次10000rpmX 后固定：用2％四氧化锇固定1．5h。 冲洗：用pH7．2的磷酸缓冲液冲洗三次(每次10000rpm×10min)。