浓缩苹果汁中扩展青霉菌实时PCR快速检测条件的优化.pdfVIP

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2017-09-01 发布于河北
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维普资讯第 35卷第 11期西北农林科技大学学报 (自然科学版) Vo1．35 NO．11 2007年 11月 JournalofNorthwestA ＆ FUniversity(Nat．Sci．Ed．) NOV．2007 浓缩苹果汁中扩展青霉菌实时PCR 快速检测条件的优化樊明涛，毕静莹，刘邻渭，ManselW Graffith，HaifengWang (1西北农林科技大学食品科学与工程学院，陕西杨凌 712100；2CanadianResearchInstituteforFoodSafetyand FoodScienceDepartment，UniversityofGuelph，Guelph，Ontario，NIG 2Wl，Canada) [摘要] 为了研究苹果汁生产中棒曲霉素产生菌的快速检测，利用实时PCR方法快速检测扩展青霉的可能性，对扩增条件进行优化。在 po1ygatacturonase基因引物设计和传统 PCR扩增扩展青霉 DNA 的基础上，研究实时 PCR扩增时退火温度、引物浓度以及底物质量浓度对扩增效果的影响，以获得最佳的参数。结果表明，用 Lightercy— cler实时PCR扩增扩展青霉DNA的最佳退火温度为61℃，最佳引物浓度为0．2O～O．40~／mol／L，底物质量浓度对实时PCR扩增的影响较小在以上参数下，可以获得良好的PCR扩增曲线、产物溶解曲线以及清晰的产物条带研究获得的快速检测扩展青霉的实时PCR参数，可用于浓缩苹果汁工业化生产中扩展青霉的快速检测，也可作为其他微生物实时PCR检测时的方法学参考。 [关键词] 苹果汁；扩展青霉；PCR检测 [中图分类号] Q555 [文献标识码] A [文章编号] 1671—9387(2007)11-0084—06 ConditionoptimizationofrealtimePCR used inrapiddetectionof Penicillium expansum inapplejuiceconcentrate． FAN Ming—tao ，BIJing—ying ，LIU Lin—wei，ManselW Graffith。，WANG Hai—feng。 (1CollegeofFoodScienceandEngineering，NorthwestA FUniversity，Yangling，Shaanxi712100，China； 2CanadianResearchInstituteforFoodSafetyandFoodScienceDepartment，UniversityofGuelph，Guelph，Ontario，NIG2W1，Canada) Abstract：InordertotodetectPenicilliumexpansum rapidlyinapplejuiceconcentration，therealtime PCRmethodwasused todetectPenicillium expansum andtheconditionswerealsooptimized．Basedon theprimersfrom polygatacturonase gene，theeffectofannealing temperature，primerconcentration and templateconcentrationofrealtimePCR ontheamplificationwasevaluated．Theresultshowedthattheam— plificationtemperatureofPenicillium expansum DNA was61℃