肝切片培养技术在药物代谢、毒理学研究中的应用.pdfVIP

第十七届全国儿科药学学术会议 中国·南京2006 度，而达到降低血氨保护肝脏功能。 2．3变态反应性疾病 近年来应用微生态疗法辅助治疗食物过敏，特应性皮炎或湿疹及过敏性腹泻等变态反应性疾病在国外颇受关注。以 上疾病常伴随存在，根本治疗为去除变应原，但实际应用中很难达到。在幼年时期增加对细菌的接触可能可以预防过敏。 rhamnosusGG可使婴儿湿疹发病率降低一半。研究认为益生菌如乳酸杆菌可能通过提高肠道渗透性，平衡肠道微生态环 境、改善肠道免疫防御屏障特别是提高分泌型IgA水平，下调局部或全身性变态反应的致炎细胞因子，缓艇廷E介导的 特异性变态反应，从而降低发病率，减轻症状。 2．4婴儿期营养 有报道，1-6岁小儿服用加有乳酸杆菌的牛奶7个月，可减少消化道感染及合并症的发生，并减少抗菌药物的使 用。 3结论 综上所述，益生菌是一种较为安全的制剂，但不是万能药，有适用的人群和适应症，要防止夸大疗效，扩大适应 症。在临床应用中有几点应尤为注意：①由于肠球菌可能具有多重耐药性，包括对万古霉素的耐药，故应注意带有耐 药质粒的菌株不可作为益生菌制剂；②同时使用抗生素和益生菌制剂是否会影响活菌制刺的功效及活菌制荆中是否会 有耐药因子传递给人体中其他细菌，造成耐药因子扩散是益生菌制剂对抗生素耐受性的两个关键问题，如培菲康等不 宜与抗菌药配伍，整肠生可与庆大霉索、头孢噻肟配伍，不宜与环丙沙星、氧氟沙星、呋喃妥因、四环素配伍；③对 于免疫缺陷病人的败血症和肝肿大，作为主流免疫调节产品仍需慎重考虑。 肝切片培养技术在药物代谢、毒理学研究中的应用 李嵘 南京医科大学附属南京儿童医院 210008 liverslices culture，PCLS)是一种将组织切片机与动态器官培养系统相结合的 精密肝切片培养技术(precision-cut 新技术，它在亚器官的水平上，研究化合物的代谢，测定CYPmRNA诱导，既避免其它器官或组织对肝脏代谢的影 响，维持细胞问及细胞与基质问的联系，又保持了游离肝细胞的功能特点，是一种简单、经济的体外实验方法。对此， 本文就其在药物代谢和毒理学领域的应用作一综述。 1肝切片培养技术 肝切片培养技术是在体外环境中，将切片与受试化学物共同孵育，一定时问后测量肝细胞本身或孵育液中某些戚 份的改变，来研究肝脏在该化学物作用下的反应。 1．1样本选择：最常使用的动物是大鼠，因其经济易得，切片也较易制备。另外，还可使用小鼠、豚鼠等啮齿动 物、鳟鱼、小牛、狗、猕猴、猪等以及人肝标本。 1．2制备及孵育：切片切制过程应控制在15—30min之间，时间过长易造成肝细胞死亡、代谢能力降低。肝片厚度 应均匀，选材应相似，一般在两主肝叶上选取。切制的肝片立即浸入02饱和过的缓冲液中37。C恒温孵育。实验结束 时，切片重量变化在±15％以内，以确定未发生溶胀。如采用活体切片机，可使肝片的损伤程度降至最低。 l_3培养系统：最初使用静态培养技术，但切片与培养液接触的界面易发生变质，切片周围代谢物液度较高， culture 相对原药浓度降低易造成代谢速率的改变。因此，多采用动态培养系统(dynamicorgan 302 第十七届全国儿科药学学术会议 中国·南京2006 孔碟培养与动力机培养两种技术进行比较，结果发现在7一乙酰香豆素代谢中，多孔碟培养优于动力机培养，肝细胞 括力可维持24h，最佳在1lh左右。 1．4采用冷冻技术提高药物代谢能力的留存 实验表明，每次培养中切片数目的增长并不能导致代谢的相应增长，在组织培养中一些药物代谢酶的表达会降低， 通过冷冻技术可提高药物代谢能力。DaysH等采用Me2SO处理后，将切片夹在隔有垫片的铝碟中，浸没在液氮中冷 冻保存。使用时37％水浴融化．通过LDH和ALT测切片活性，发现其生存能力接近新鲜切片，高于常规冰冻小瓶中 好保存．37℃融化后，通过体外B—NF诱导CY