液相色谱仪与日常维护和故障排除.docVIP

液相色谱仪的日常维护和故障排除2005年11月09日 15:51 邱赫男? (国家环保总局标准样品研究所，北京，100029) ??????? 来源：《分析仪器》 1??????? 日常维护 1．1 泵 泵是液相色谱仪的心脏，须精心维护和保养。处于良好工作状态的泵，其基线平稳，保留时间重现性好，梯度洗脱时压力变化缓慢而平稳。要使泵具备良好的操作性能，应该保持泵系统的清洁。具体做法如下： （1）要选择优质的容剂和试剂，在进入仪器前用0。45um膜过滤，并进行脱气处理。 （2）泵开始使用时，一定要用合适的流动相彻底清洗干净。 （3）定期检查并更换在线过滤片及有关的垫圈，并经常清洗进液处的微孔滤头。 （4）改变流动相时，应避免沉淀产生，以防止泵堵塞。 1．2 色谱柱 色谱柱是化合物分离的关键。保养良好的色谱柱应具有很高的塔板数，且仪器基线平稳。色谱柱比较娇气，在平时的工作中须注意以下事项： （1）色谱柱不能够碰撞、弯曲或强烈震荡；安装时，一定要保证阀件或管路的清洁。 （2）流动相在使用前必须进行脱气处理，尽量不使用或少使用高粘度的流动相。 （3）在满足灵敏度的情况下，尽可能使用小进样量。如果样品比较“脏”，要进行净化或提纯处理。 （4）分析结束语后，要清洗掉进样阀中残留的样品，并用流动相或适当的溶剂清洗色谱柱。 （5）如色谱柱长期不用，应该用适当的有机溶剂保存并封闭或定期给柱子补充合适的流动相。 1．3 检测器 对于紫外检测器，在分析柱平衡的差不多时，开启检测器；在分析完成后，马上关闭检测器。 1．4 进样器 分析结束后，应反复冲洗进样口，防止样品的交叉污染或堵塞。 2 常见故障的分析与排除 既使日常精心维护的液相色谱仪，随着使用时间的增加或使用者经验不足也会出现一些问题或故障。现将液相色谱仪容易出现的故障及解决办法介绍如下： 2．1 保留时间变化 保留时间的变化有三中情况：波动、缩短、延长。 保留时间出现波动时，应检查柱温是否处于恒温状态，如果设置为室温，气温的变化会引起保留时间的波动，应该设置为恒定温度；等度和梯度间还没有充分达到平衡状态时，应该用十倍以上柱体积的流动相去平衡色谱柱；缓冲液浓度太低时，应换用＞25mml/L的缓冲液；色谱柱被污染或已经接近柱寿命时，应更换保护柱或换新色谱柱。 保留时间缩短时，流速增加，应检查流速的设定；柱温高时，应检查柱的设置；进样量太大时，减少样品用量或降低样品浓度；流动相的组成发生了改变，比如流动相中易挥发有机相蒸发，两相之间互溶不好，会导致流动相不均匀或某一相出现部分沉淀；流动相的PH值应保持3~7.5范围内，否则会引起柱键合相的流失。 保留时间延长时，流速减小，应检查流速的设定和管路是否有泄露；柱温低时，检查柱温的设置；流动相的组成发生了改变，比如流动相中易挥发有机相蒸发，两相之间互溶不好，会导致流动相不均匀或某一相出现部分沉淀；检查流动相的pH值是否3~7.5范围内，否则会引起柱键合相的流失。 2．2 峰拖尾 色谱柱超载时，要减少进样量或稀释样品或使用高溶量的色谱柱；色谱柱性能不佳时，更换色谱柱；死体积或柱外体积过大时，将连接降至最低，并对所有连接点作合理的调整，尽可能采用细内径的连接；加入硅羟基，其作用是纯化色谱柱，增加缓冲液的浓度，降低流动相的pH值，纯化样品；出现峰干扰时，应清洁样品，调整流动相。 2．3????????? 峰展宽 进样体积过大时，用流动相配样；样品过载时，进小浓度、小体积样品；在进样阀中造成峰扩展时，进样前后排出气泡，以降低扩散；流动相粘度过高时，提高柱温，并采用低粘度流动相；等度洗脱，保留时间过长时，要增加流速或改用梯度洗脱；柱外体积过大时，将连接管径和连结管降至最小[1]。 2．4 基线噪声 流动相或检测器中有气泡时，要对流动相进行脱气处理；检测器灯有连续噪声时，更换氘灯；出现由污染引起的随机噪声时，应清洗色谱柱、净化样品、使用HIPLC级试剂；偶然有噪声时，可能是来自电源的干扰，如果电压不稳时，应采用稳压电源。 2．5 肩峰或分叉 进样量太大或样品浓度过高时，要减少进样量或稀释样品；样品溶剂太强时，应使用软弱的样品溶剂；色谱柱性能欠佳时，应更换色谱柱。 2．6????????? 色谱柱未达到平衡时，要继续平衡色谱柱；样品中溶剂出峰时，使用流动相作样品的溶剂；出现进样阀残余峰时，使用强溶剂清洗进样阀，并改进阀和样品的清洗程序；流动相用水不合格率，应使用HPLC级的水。 3????????????????? 使用注意事项 在使用混