胰腺癌中微小RNA基因遗传变异的研究.pdfVIP

江苏省第五次胰腺外科学术会议·大会交流 Blot和RT—PCR 方法 本研究建立在胰腺星状细胞原代培养的基础上，结合免疫组化、Western 胰腺癌细胞增殖和侵袭能力的影响。 结果 我们发现Galectin—l主要由胰腺星状细胞，而不是由胰腺癌细胞株表达、分泌。在共培养 体系中，胰腺星状细胞分泌的Galectin一1能够促进胰腺癌增殖和侵袭。 结论 胰腺星状细胞高表达并分泌Galectin—l，进而能够促进胰腺癌细胞增殖和侵袭。 胰腺癌中微小RNA基因遗传变异的研究 朱政高文涛苗毅钱祝银 南京医科大学第一附属医院普外科(210029) 胰腺癌疗效预后差，迫切需要寻找新的诊断治疗手段。胰腺癌作为散发性体细胞遗传病，其发生的 遗传基础是突变导致的癌基因／抑癌基因的异常激活／失活。肿瘤遗传学认为，肿瘤发生源于突变导致 的癌基因／抑癌基因的异常激活／失活。近年来，利用基因组学的方法的深入研究，已建立了与胰腺导管 腺癌(PDAC)的病理发展过程对应的、多阶段、多基因突变的遗传学异常的模型，并且在基因操纵的动 物模型上得到验证，同样说明了癌基因／抑癌基因突变是胰腺癌发生主要遗传学基础。 是高度保守的、真核细胞重要的转录后调节机制。已经证实在干细胞分化、发育等方面起广泛重要的调 节作用。miRNA基因首先由pol 70nt、具有Stem—loop结构的的I NAs。 近来研究发现，miRNAs在肿瘤中存在表达异常，并且调节信号传导、细胞增殖、凋亡等重要生物学 过程，参与肿瘤的发生发展，起着类似于癌基因(oncogene)和抑癌基因(tumorsuppressor)的作用，被称 celldeath 对靶基因PTEN、TPNl、PDCD4(Programmed4)的抑制，两者均导致细胞凋亡减少、促进增殖、 常。 suppressor)的一个基本特征，是肿瘤在分裂、传 但是，突变是癌基因(oncogene)和抑癌基因(tumor 代后能维持并累积变异的基础。是否存在microRNA基因的遗传突变导致表达功能异常，目前还是空 主要的筛选手段。在胰腺癌中也已有几篇文献报道。人们甚至发现胰腺癌中mieroRNA表达谱比已经 发展十余年cDNA表达谱更准确地反映肿瘤的来源和分化程度；但microRNA研究领域最令我们振奋发 现是：micmRNA麻雀虽小，五脏俱全，也有多态、SNP和突变。由于基因表达信息往往受到环境、应激等 因素影响，具有不稳定性，表达芯片往往发现大量与肿瘤表型无关或bystander的表达异常，但遗传性变 异是稳定的，更能反映miRNA异常在肿瘤中扮演的角色。如能发现存在基因遗传突变导致表达功能异 常的microRNA，将提示它可能如癌基因和抑癌基因相似调控细胞的基本功能，可能是肿瘤发生发展中 主要的机制。 ·138· 江苏省第五次胰腺外科学术会议·大会交流 基于近年来生物信息学、基因组学、转录组学技术迅猛发展，基于对MicroRNA的认识的深入，我们 发展了以下的研究策略：对于之前发现位于启动子区域突变将野生型和突变型分别克隆人启动子报道 载体，进行启动子试验(promoterassay)。明确其作用机制，将最终找到在胰腺癌中扮演的癌基因／抑癌 基因的角色的MicroRNA，将对肿瘤、胰腺癌的分子遗传学研究、MicroRNA研究其巨大推动作用。 材料与方法 细胞株 MultisoureeGenomicDNAMini— 细胞株均按照ATCC推荐培养条件培养。基因组DNA使用AxyPrepTM prep试剂盒抽提。 目的基因的获得 如下：03940c5min(窑)94。C30s(耋)49。C30s(互f／2。CImin(曼)72。C5min(◎4。Cforever．②一④步重复35个循 环。使用AXYGEN切胶纯化试剂盒将PCR产物切胶回收。 构建质粒载体 使用内切酶KpnI、XhoI(MBI)37 物)，并扩增。将含有目的条带的菌液送上海英