乙嘧酚磺酸酯诱导细胞基因HPRT位点和TK位点突变的研究.pdfVIP

其它研究 乙嘧酚磺酸酯诱导细胞基因HPRT位点和TK位点突变的研究 张康’庄宛2程桂红1李龙“‘ (1．华中科技大学同济医学院公共卫生学院卫生毒理学系，湖北武汉430030； 2．厦门出入境检验检疫局检验检疫技术中心，福建厦门361026) 【摘要】背景与目的：评价乙嘧酚磺酸酯原药对中国仓鼠卵巢ClIO细胞基因f1P87位点 。和小鼠淋巴瘤L5178Y细胞基因TK位点的影响。材料与方法：使用乙嘧酚磺酸酯原药对CHO 细胞和L5178Y细胞进行梯度染毒，实验设置5、15、50、150Pg／ml4个浓度组，分别对CttO 细胞进行绝对集落形成率，相对集落存活率，集落形成率，突变频率的测定；对L5178Y细胞 进行接种效率，相对存活率，突变频率的测定。结果：随着乙嘧酚磺酸酯原药剂量的逐渐增高， 细胞的绝对集落形成率、相对集落存活率、集落形成率、平板效率和相对存活度明显下降，但 是设计的4个剂量组基冈突变率与阴性对照组比较PO．05，差异无统计学意义。结论：在本实 验条件下，乙嘧酚磺酸酉旨原药对CHO细胞和L5178Y细胞具有明显的细胞毒性，但其对细胞基 因／／PAT位点和缉位点的突变率无明显影响。 【关键词】HPRT基因；TK基因；突变；乙嘧酚磺酸酯 嘧啶类化合物因具有不同的生物活性，如杀虫、杀菌、除草、抗病毒等¨’，在农业中的应 用已受到广泛关注。乙嘧酚磺酸酯(bupirimate)属于嘧啶类内吸性杀菌剂，具有用量少、高效、 低毒、对自粉病有特效等优点，因此取代了乙嘧酚和二甲嘧酚等农药旧’。乙嘧酚磺酸酯，浅棕 色蜡状固体，由2一乙氨基一4一羟基一5一丁基一6一甲基嘧啶与N，N一二甲基氨基磺酰氯反应生成。属 于腺嘌呤核苷脱氨酶抑制剂，可被植物的根、茎、叶迅速吸收传导，具有保护和治疗作用，主 要用于经济作物和观赏植物白粉病的防治。近年来乙嘧酚磺酸酯的合成与生物活性研究已成为 当今绿色农药创制的热点”’，但目前国内外对乙嘧酚磺酸酯诱导体外基因突变的研究少有报道。 因此，本次实验以CHO细胞和L5178Y细胞作为实验对象，研究乙嘧酚磺酸酯原药对嬲位点 和硝位点的影响，为探讨乙嘧酚磺酸酯的遗传毒性及其发生机制提供实验依据。 l材料与方法 1．1材料 1．1．1实验用细胞株／／PAT位点突变分析采用中围仓鼠卵巢细胞株(CHO)，CH0细胞来源于 武大的巾国典型培养物保藏中心。硝位点突变分析采用小鼠淋巴瘤细胞株(L5178Y)，L5178Y TK+／一clone细胞购自上海麦莎生物科技有限公司 1．1．2受试物及配置方法乙嘧酚磺酸酯原药，浅棕色粉末，含量95％。用二甲基亚砜(DMSO) 配制成各不同浓度的供试液。 1．1．3主要试剂6一硫代鸟嘌呤(6一TG)，三氟胸苷(TFT)，代谢活化剂(Ss)为本室自制， 雄性大鼠经多氯联苯(Aroclor1254)诱导。驳肝制成匀浆，经9，000min，其上清 g离-L,IO 环磷酰胺(CTX)，-S。为、踟S。阴性对照：二甲基距砜(DMSO)。 1．2方法 1．2．1剂量的设置 预实验处理细胞，处理2天后求算细胞增殖率，使细胞增炳率为阴性对照组的10％～20％荆甓 设为最高剂鼍H1，其他剂量从最高剂量以等差设定，确定乙嘧酚磺酸酯原药的剂蹙分另U为5、15、 50、150u u g／ml。CHO细胞：+S9为N一亚硝基胍(2．5pg／m1)．一S9为MMS(10g／m1)为 阳性对照；L5178Y细胞：+S，为CTX(2．5u u g／m1)，-S，为卿S(10g／m1)为阳性对照。阴 233 其它研究 性对照：DMSO为阴性对照。 1．2．2CHO细胞脚厂位点突变分析 试验前ld，接种细胞于培养瓶中，置于37℃孵箱培养。试验时吸去培养瓶中的培养液，加 入设计浓度的受试物、S,-mix(不加入$91ix的样品，用培养液补足)及一定量的不含血清培 养液，置孵箱中处理3h～6h后，吸去培养液，用Hank’s液洗细胞三次，加入含胎牛血清的培 养液。在受