溶藻胶弧菌脂多糖对大菱鲆的免疫研究.pdfVIP

280 海水健康养殖与水产品质量安全 外，预防疾病时，可在饲料中添加黄芪多糖、酵母多糖等具有特异性免疫功能的免疫多 糖，增强机体的抗病能力。 4．建立健全“水产养殖病害防治网络体系” 以市、县(区)、乡(镇)三级水产技术推广站为依托，建立健全全市水产养殖病害 防治网络体系，充分利用病害防治网络体系，加强水产养殖病害的预测、预报工作，使我 们的水产养殖病害防治工作能力做到有的放矢，能有效地控制和尽量减少病害的发生，从 而减少水产养殖病害对渔业经济造成的损失。 黄富钦 (漳州市水产技术推广站363000) 第六节 溶藻胶弧菌脂多糖对大菱鲆的免疫研究 海水鱼类养殖已成为我国沿海地区的支柱产业，随着养殖生产的不断发展，各种疾病 越来越严重，为广大养殖单位造成较大损失。细菌脂多糖(LPS)作为免疫增强剂常用于 免疫学研究和临床医学中，脂多糖在海水养殖病害防治中应用较少，已有研究证明，脂多 糖可提高对虾血细胞的吞噬活性和贻贝等的酚氧化活力。有关脂多糖对大菱鲆免疫活动的 影响，国内外尚未见报道。在非特异性免疫方面，溶菌酶以及吞噬活性是重要的非特异性 防御因子，特别是鱼类生理防御水平的重要标志，也可以体现病原菌及其他环境因素对鱼 体健康的影响。我们选用人工养殖的大菱鲆为实验材料，以注射和口服方式接种溶藻胶弧 菌脂多糖后，于不同时间测定其血清中溶菌酶的活力和白细胞吞噬活性，以得到脂多糖对 鱼类血清中与其免疫有关的各种因素影响的规律，从而为弄清鱼类的免疫机理积累资料， 并将细菌脂多糖应用于鱼类养殖业，为增强养殖鱼类免疫能力、预防病害提供理论依据。 一、材料与方法 (一)材料 实验用的溶藻胶弧菌、白色葡萄球菌由山东省疾病预防控制中心菌种室提供，实验用 em和47．2g，由龙口市佳禾水产科技研究 大菱鲆幼鱼平均体长和平均体质量分别为13．3 中心提供。 实验采用溶菌酶试剂盒由南京建成生物工程研究所出品。 (二)溶藻胶弧菌脂多糖的提取 g湿重加蒸馏水15 采用Westphal等(1965)的热酚法提取脂多糖。细菌收集物按5 min，冷却后用 mL，反复冻融3～5次，加等量90％苯酚，68。C一70。C加热并剧烈搅拌30 3000 r／min离心30min，留上层水相，中层变形蛋白弃之，下层沉淀按上述方法反复提取 h，蒸馏水透析48h，换水6次，然后用聚 水相，至少两次。水相装透析袋，流水冲洗48 乙二醇6000浓缩，测定多糖浓度。 (三)实验设计 实验共分4组，实验组分为I、Ⅱ、Ⅲ组，设对照组一组。实验用脂多糖浓度为2．4 第七章 海洋生物的疾病防治技术 281 mg／mL，实验I组为口服组，将脂多糖以0．1％的比例添加到饲料中，实验开始前在实验 水槽内驯养大菱鲆幼鱼一周，使其适应环境能正常摄食后，每日足量投喂两次，连续投喂 3d。实验Ⅱ、Ⅲ组分别注射脂多糖0．1mL、0．2mL；对照组注射生理盐水0．2mL。此后 按成鱼养殖管理操作，投喂普通饲料，每日吸污一次，实验水温控制在16％～1812。 (四)测试方法 1．溶菌酶测试方法 采用空白对照法进行测定(表1)。 表1 样品与试剂混匀后，准确水浴15min，立即取出置于0℃以下的冰水浴中3min，逐 管取出倒人1em光径的比色皿中，530 nlIl下以蒸馏水调比色，测各管得透光度瓦，(％ 即37℃水浴15min后的透光值)。 测定管透光度￡，死一空白管透光度OTl， 溶菌酶含